液相色谱-串联质谱法测定牛和猪肌肉中安乃近代谢物残留量

时间：2023-03-25 00:20:13来源：food栏目：食品快速检测阅读：

液相色谱-串联质谱法测定牛和猪肌肉中安乃近代谢物残留量

[db:作者] / 2022-12-21 00:00

14.2.1.1 适用范围

适用于牛和猪肌肉中4-甲酰氨基安替比林、4-乙酰氨基安替比林、4-甲基氨基安替比林和4-氨基安替比林残留量的液相色谱-串联质谱测定。方法检出限：4-甲酰氨基安替比林为1.8μg/kg；4-氨基安替比林和4-甲基氨基安替比林为1.5 ug/kg；4-乙酰氨基安替比林为1.0ug/kg。

14.2.1.2 方法原理

肌肉中安乃近代谢物残留用硫酸钠溶液(pH=7)提取，过滤后，经Bond Elut C18固相萃取柱或相当者净化后，用甲醇洗脱，氮气吹干。残渣用甲醇+水溶解，供液相色谱-串联质谱仪测定，内标法或外标法定量。

14.2.1.3 试剂和材料

甲醇、乙腈、醋酸铵：色谱纯；硫酸钠、亚硫酸钠：分析纯。

硫酸钠+亚硫酸钠提取溶液：准确称取14.20g无水硫酸钠和2.52g亚硫酸钠，用水溶解，并使其体积达到约950mL，然后用0.5mol/L的稀硫酸调节溶液的pH至7.0，用水定容至1000mL；淋洗液：甲醇+水(1+19，v/v)；样品定容液：甲醇+水(1+9，v/v)。

4-甲基氨基安替比林、4-乙酰氨基安替比林、4-甲酰氨基安替比林和4-氨基安替比林标准物质：纯度≥99%。

内标标准物质：4-异丙基氨基安替比林，纯度≥99%。

标准储备溶液：100mg/L。准确称取适量的各种安乃近代谢物标准物质，用甲醇配制成浓度为100 mg/L的标准储备溶液，避光-18℃保存，可使用3个月。

混合标准储备溶液：1.0mg/L。吸取每种适量标准储备溶液，用甲醇稀释成1.0mg/L的混合标准工作溶液，避光-18℃保存，可使用1个月。

内标储备溶液：准确称取适量的内标标准物质用甲醇配制成浓度为100mg/L标准储备溶液，遇光-18℃保存，可使用3个月。

混合标准储备溶液：1.0mg/L。吸取每种适量标准储备溶液，用甲醇稀释成1.0mg/L的混合标准工作溶液，避光-18℃保存，可使用1个月。

内标储备溶液：准确称取适量的内标标准物质用甲醇配制成浓度为100 mg/L标准储备溶液，避光-18℃保存，可使用3个月。

内标工作溶液：0.20mg/L。吸取适量的内标储备溶液，用甲醇稀释成0.20mg/mL的内标标准工作溶液，避光-18℃保存，可使用1个月。

基质混合标准工作溶液：吸取适量的混合标准储备溶液和适量内标工作溶液，用空白样品提取液配成浓度为1.0μg/L、5.0μg/L、10.0ug/L、20.0μg/L、40.0ug/L和内标浓度为0.20mg/L的基质混合标准工作溶液。当天配制。

Bond Elut C18固相萃取柱或相当者：500mg，3mL。用前分别用5mL甲醇和5mL水处理，保持柱体湿润。

14.2.1.4仪器和设备

液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源(ESI)；固相萃取装置；氮气浓缩仪；旋涡混匀器；分析天平：感量0.1mg和0.01g；真空泵；均质器；移液器：10～100μL和100～1000μL；聚丙烯离心管：50mL，具塞；pH计：测量精度±0.02；低温离心机：可制冷到4℃；玻璃离心管：15mL。

14.2.1.5样品前处理

(1)试样制备

取有代表性的牛或猪肌肉组织，制成实验室样品。试样分为两份，置于样品瓶中，密封，并做上标记。制备好的试样置于-18℃冰柜中避光保存。

(2)提取

称取5g试样，精确至0.01g。将上述样品置于50mL聚丙烯离心管中，加入0.25mL浓度为2.0mg/L的内标工作溶液，然后加入15mL硫酸钠+亚硫酸钠提取溶液，均质1min，在10℃以4000r/min离心5min。将上清液转移到另一个干净的50mL容量瓶中,残渣再分别加入15mL、10mL硫酸钠+亚硫酸钠提取溶液提取二次，离心后，合并上清液，并用硫酸钠+亚硫酸钠提取溶液定容至50mL，混合均匀，然后用玻璃滤纸过滤，待净化。

(3)净化

取25mL提取液放入C18固相萃取柱中，以约1mL/min的流速使样液通过固相萃取柱，待样液全部通过后，依次用5mL水和5mL甲醇+水淋洗液淋洗固相萃取柱，弃去全部流出液，减压抽干固相萃取柱10min。最后用5mL甲醇洗脱，洗脱液收集于15mL玻璃离心管中，置于氮气浓缩仪上在55℃吹至近干，用样品定容液定容至1.0mL。定容液混匀后，过0.45um滤膜，供液相色谱-串联质谱测定。

同时取阴性样品，按上述提取净化步骤制备空白样品提取液，用于配制基质混合标准工作溶液。

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