牛、猪肝脏和肌肉中卡巴氧和喹乙醇及代谢物残留量测定分析方法的选择

时间：2023-03-24 23:50:20来源：food栏目：食品快速检测阅读：

牛、猪肝脏和肌肉中卡巴氧和喹乙醇及代谢物残留量测定分析方法的选择

[db:作者] / 2022-12-21 00:00

15.2.1.7 分析方法的选择

(1)样品处理方法

1)卡巴氧原形药的提取方法

卡巴氧在水和丙酮等极性溶剂中溶解性差，文献中通常选择甲醇-水溶液作为组织提取液，溶液中不可避免地含有大量水溶性蛋白和色素等杂质，这些杂质成分复杂并带有颜色，使提取液混浊，严重影响定性与定量效果，同时污染色谱柱。在选择提取液的试验中，试验发现甲醇-水溶液对卡巴氧提取效果不如乙腈，为此，本研究分别使用乙酸乙酯、乙腈以及二者混合液进行样品提取，试验数据表明，以乙腈作为提取液回收率普遍较低，只有40%~50%；而采用乙酸乙酯-乙腈(1+1)混合溶剂的提取效果最佳，既能达到满意的回收率，又能减少弱极性杂质的干扰。为此，本研究采用乙酸乙酯-乙腈(1+1)混合溶剂为提取液，在提取前加入中性氧化铝于样品中，提取过程用正己烷脱脂，以减少脂肪的干扰。提取溶液经减压旋转蒸发至干，定容，LC-MS/MS检测。

2) 代谢产物DCBX、QCA和MQCA的提取方法

DCBX、QCA和MQCA等代谢物在动物体内与蛋白质以结合态存在，通常可采用酸水解、碱水解或酶解的方式将目标化合物与蛋白组织分离，其中酶解的效果最好，不仅反应条件最温和，且与动物组织分离最为彻底。文献报道温度和pH值对酶的生物活性影响极大，本实验方法选用Protease蛋白酶进行酶解，Protease在pH8.5、温度47℃时活性最强。酶解之前，先在样品中加0.6%的甲酸溶液，置于47℃空气浴中1h，使动物组织中天然存在的酶失活；然后用Tris缓冲溶液调节pH，加入Protease蛋白酶，置于47℃空气浴中过夜(16～18h)。

在样品溶液中加入0.3mol/L HCI，使酶解液酸化后，采用阴离子交换固相萃取柱进行净化，本研究对比了Bond Elute Certify II 和Oasis MAX两种商用SPE柱的效果，结果表明Oasis MAX的净化效果和回收率优于前者，本研究对固相萃取所用溶液、流速控制、淋洗和被测物的洗脱等条件进行优化，根据化合物性质，DCBX、QCA和MQCA需要分两步洗脱，第一步用二氯甲烷洗脱DCBX，第二步用含2%甲酸的乙酸乙酯洗脱QCA和MQCA。

(2)液相色谱条件

1)色谱柱的选择

比较了Phenomenex Luna C18、Waters Atlantis dC18以及Inertsil ODS-3等不同填料色谱柱的分离效果，结果表明，使用Inertsil ODS-33um，2.1×100mm色谱柱时，各化合物的出峰时间、分离度和峰形较好。

2)流动相的选择

质谱采用正离子模式进行检测时，通常使用有一定酸度的流动相，以使被分析物容易质子化带上正电荷，从而提高检测的灵敏度，本实验比较了0.05%～0.3%的甲酸溶液，结果表明，使用0.1%的甲酸溶液作为流动相各组分得到比较好的分离，并且质谱上有较强的响应，故实验选择0.1%的甲酸溶液作为流动相。另外，流动相体系还包括甲醇和乙腈，采用梯度洗脱，柱温30℃，进样量30 μL。

(3)质谱条件

动物组织的成分复杂，样品基质容易对目标分析物产生干扰，本研究采用电喷雾离子源(ESI)和正离子扫描方式进行LC-MS/MS检测，多反应监测模式(MRM)能有效的消除样品基质的干扰，大大提高方法的灵敏度。为了消除样品基质对离子化的抑制作用，在标准溶液和测试样品溶液中都加入已知量的内标QCA-d4。选取丰度最强的离子作为各组分的监测离子，通过对质谱条件进行优化，使每种化合物的分子离子与特征碎片离子的例子对强度达到最大，四种化合物选定的质谱条件为：离子源温度： 450℃； NEB： 8.00； CUR： 7.00； CAD： 5.00； IS： 5000.00； EP： 10.00。

百检网就是一家权威的食品检测机构，提供各种检测需求服务，有任何疑问欢迎电联或者在线咨询客服。

上一篇：牛、猪肝脏和肌肉中卡巴氧和喹乙醇及代谢物残留量测定步骤

下一篇：硝基咪唑类药物理化性质和用途