喹噁啉类药物残留分析技术——净化方法（一）

时间：2023-03-25 00:06:52来源：food栏目：食品快速检测阅读：

喹噁啉类药物残留分析技术——净化方法（一）

[db:作者] / 2022-12-21 00:00

(2)净化方法

喹噁啉类药物残留分析主要采用的净化方法有液液分配(LLP) 和固相萃取(SPE) 方法。LLP 所需时间较长，而喹噁啉类药物不稳定，净化过程不易太长，所以目前最常用的方法是SPE技术。

1)液液分配(liquid liquid partition，LLP)

本类药物原形及其脱氧代谢物，直接用有机溶剂提取后，利用药物极性，采用溶剂对LLP净化。Huang等测定鸡血液、肌肉、肝脏、肾脏和脂肪中CYX及其代谢物BDCYX，提取液蒸干后，用乙腈-正己烷LLP脱脂，乙腈层再净化后用HPLC测定。CYX和BDCYX的LOQ为0.025μg/g(血浆和组织)，方法回收率在73%～87%之间，日间RSD小于9.86%。Zhang等提取羊组织中CYX及其代谢物BDCYX。肌肉、肝脏、肾脏用乙酸乙酯提取，脂肪组织用乙腈提取，提取上清液蒸干，用乙腈-正已烷LLP净化，取乙腈层蒸干用甲醇复溶后HPLC测定，CYX回收率为65%～79%，日间CV为6.7%～11.1%；BDCYX回收率为70%～92%，日间CV为4.7%～15.9%；LOD为15μg/kg，LOQ为25μg/kg。

QCA和MQCA与组织结合，需要解离后提取，而解离方法决定了后续的净化步骤；另外，QCA和MQCA呈酸性，在酸性溶液中以分子状态存在，在碱性溶液中以离子态存在，这成为开发LLP方法的基础。

碱性水解后的净化过程往往涉及多次LLP，较为复杂。Hutchinson等分析猪肝中的QCA，碱性水解液用浓盐酸中和后，用乙酸乙酯提取，提取液用0.1mol/L磷酸钠(pH8.0)LLP反萃取，经SCX SPE柱净化后，吹去氢氧化钠-甲醇洗脱液中的甲醇，用盐酸中和，再与乙酸乙酯LLP净化，乙酸乙酯层吹干复溶后，用LC-MS/MS测定。方法回收率为89%～111%，CV为0.15%～10%，CCa 和CCβ分别为0.16 μg/kg和0.27 μg/kg。Huang等测定鸡组织中CYX的代谢物QCA残留，样品经碱性水解，水解液用浓盐酸调节pH<1后，用乙酸乙酯提取，提取液再与0.5 mol/L柠檬酸缓冲液(pH8) LLP反萃取，进一步用离子排阻色谱柱净化，甲醇-水洗脱液用盐酸酸化后，再与氯仿LLP，蒸干氯仿层，用流动相溶解后，HPLC分析。鸡组织中QCA的LOQ为0.025 mg/kg(内脏组织)和0.02 mg/kg(肌肉)，回收率为70%～78%，CV为7.69%～11.43%。用同样的方法，Huang等提取和净化猪和鸡组织中QCT的代谢物MQCA，样品的碱性水解液用浓盐酸调节pH<1后，用乙酸乙酯提取，提取液再与水LLP，弃去水相，乙酸乙酯层再用0.5 mol/L柠檬酸缓冲液(pH8)反萃取，反萃取液经离子排阻色谱净化后HPLC测定，LOQ为0.05 mg/kg，LOD为0.025 mg/kg，回收率为74%～84%，CV为4.5%～10.8%。

酸性水解提取液在多数情况下直接经LLP转移至有机溶剂中，再进一步处理。Della等采用偏磷酸-甲醇-水(2+20+78，v/v)水解猪肝脏中QCA，水解液用乙酸乙酯提取，乙酸乙酯提取液再用0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH7)LLP反萃取，水相再经SPE净化后，GC-MS测定。方法回收率为90%～102%，CV为1.7%～8.4%，CCa和CCβ分别为32μg/kg和34μg/kg，LOD为0.2μg/kg，LOQ为0.7μg/kg。

Wu等采用5%偏磷酸-10%甲醇溶液水解提取猪肝脏中的QCA和MQCA，水解液用乙酸乙酯提取，乙酸乙酯用0.01mol/L磷酸二氢钾缓冲液(用磷酸调节pH7.0)LLP反萃取，磷酸盐缓冲液再用正己烷LLP脱脂，脱脂后磷酸盐缓冲液经SPE净化后测定。回收率为70%～110%，CV小于20%。实验发现，磷酸二氢钾缓冲液浓度从0.01～1.0mol/L(用磷酸调节pH7.0)均能达到满意回收率，但是0.01mol/L浓度萃取后杂质含量最少。Sniegocki等测定猪肉中CBX代谢物(脱氧卡巴氧、QCA)和OLQ代谢物(MQCA)。样品用含偏磷酸的甲醇水解后，再用乙酸乙酯-二氯甲烷(50+50，v/v)LLP净化提取，蒸干提取物后用含0.5%异丙醇的1%乙酸溶解，LC-MSMS测定。CCa为1.04～2.11ug/kg，CCβ为1.46～2.89μg/kg，回收率在99.8%～101.2%之间。

酶解一般在弱碱性条件下进行，酶解液往往加入酸性溶液提取并脱蛋白，酸性提取液经LLP转入有机溶剂中，然后再进一步处理。Hutchinson等测定猪肝中MQCA和QCA残留，蛋白酶解液放置室温后加入1mL浓盐酸酸化提取，提取液与乙酸乙酯LLP，乙酸乙酯萃取液再用0.1mol/L磷酸钠缓冲液(pH8.0)LLP反萃取，进一步SPE净化后，LC-MS/MS测定QCA的CC。和CCβ分别为0.4μg/kg和1.2ug/kg，MQCA分别为0.7μg/kg和3.6μg/kg。刘正才等(4用蛋白酶酶解鱼、虾、猪肉、鸡肉、牛肉、猪肝中OLQ代谢残留标识物MQCA。酶解液冷至常温后，加入0.3mol/LHCI溶液振荡提取，上清液加入正己烷LLP脱脂，下层水相再用SPE净化后，HPLC测定。MQCA平均回收率在60.7%～107%之间，RSD在4.59%～14.9%之间；6种样品的LOQ为0.3～0.5μg/kg。

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