喹噁啉类药物残留测定方法——液相色谱-质谱法

时间：2023-03-24 23:57:49来源：food栏目：食品快速检测阅读：

喹噁啉类药物残留测定方法——液相色谱-质谱法

[db:作者] / 2022-12-21 00:00

(4)液相色谱-质谱法(liquid chromatography-mass spectrometry，LC-MS)

由于本类药物的毒性，许多国家严格控制或禁止临床应用，对检测灵敏度提出了更高要求，而LC-MS检测灵敏度高、特异性好，应用报道逐渐增多。喹嗯啉类药物及其代谢物的LC-MS检测主要采用电喷雾电离(ESI)方式，并可选择正离子和负离子两种监测模式；也有采用大气压化学电离(APCI)的测定方法报道。

1)APCI电离

Merou等采用LC-MS/MS测定猪、牛肌肉和猪肝中CBX、QCA和MQCA。色谱柱为ODS柱(150mm×4.6mm，5μm)，柱温30℃，流动相为1%乙酸和1%乙酸甲醇溶液，梯度洗脱，流速0.7mL/min，采用APCI正离子扫描，毛细管电压320℃，脱溶剂温度450℃，放电电压7μA，多反应监测模式(MRM)检测。CBX、MQCA和QCA的CCa为0.09～0.24ug/kg，CCβ为0.12～0.41ug/kg，回收率为92%～101%(MQCA、QCA)和60%～62%(CBX)，CV小于12%。

2)ESI电离

A.负离子检测

本类药物的代谢物为酸性物质，LC-MS检测可选择负离子模式。我国国家标准GB/T22984-2008)检测牛奶和奶粉中QCA和MQCA。采用ODS色谱柱(3um，100mm×2.1mm)分离，流动相为甲醇-乙腈以及0.1%甲酸，梯度洗脱，流速0.2mL/min，串联质谱(MS/MS)在ESI负离子、MRM模式下检测。牛奶和奶粉中平均回收率为68.2%～82.5%，RSD为3.4%～12%；牛奶中LOQ均为0.5μg/kg，奶粉中均为4.0ug/kg。Sniegocki等测定猪肉中CBX及其代谢物BDCBX和QCA、OLQ及其代谢物MQCA，采用QCA-d4为内标，LC-MS/MS测定。色谱柱为Luna C8(100mm×2mm，3um)，保护柱为C8(4mm×2mm，3um)，流动相为0.5%异丙醇-1%乙酸溶液和甲醇，梯度洗脱，柱温25℃，流速0.4mL/min，ESI负离子，毛细管电压-4500V，脱溶剂温度400℃，检测器增益电压2100V，

MRM模式检测。方法CCa为1.04～2.11μg/kg，CCβ为1.46～2.89μg/kg，回收率为99.8%～101.2%。质谱测定QCA和BDCBX时表现为基质抑制，MQCA为基质增强，而采用同位素内标校正后，测定更为准确。

B.正离子检测

相比负离子检测，采用正离子模式检测的报道更多。检测正离子时，流动相中可加酸来提高检测灵敏度

Hutchinson等用LC-MS/MS检测猪肝中QCA，色谱柱为C18(150mm×4.60mm，5μm)，流动相为甲醇-水-乙酸(40+59.6+0.4，v/v)，流速1.0mL/min，分流0.2mL/min，质谱ESI正离子，MRM检测。离子源温150℃，干燥气和雾化气均为氮气，流速分别为500 L/h和80 L/h。方法回收率为89%～111%，CV为0.15%～10%，CCa 和CCβ分别为0.16μg/kg和0.27μg/kg。Horie等用LC-MS/MS测定猪肉和肝脏中CBX、BDCBX、QCA，采用C18色谱柱(100mm×3.0mm，2.6um)，流动相为甲醇、乙腈以及0.2%甲酸，梯度洗脱，流速0.30mL/min，ESI正离子扫描，MRM模式监测。QCA的回收率为70.2%～86.3%，LOQ 为1μg/kg。

Zhang等建立了鱼肉组织中OLQ代谢物MQCA的超高效液相色谱(UPLC)-ESI+-MS/MS残留分析方法。色谱柱为UPLC BEH C18(2.1mm×50mm，1.7mm)，柱温40℃，流动相为甲醇和0.3%甲酸溶液，梯度洗脱，流速0.3mL/min，进样体积10μL，ESI 正离子扫描，源温120℃，脱溶剂温度380℃，毛细管电压3.5kV，锥孔电压25V，锥孔气流速60L/h，去溶剂气流速600L/h，锥孔气和碰撞气分别为高纯氮气和氩气。每个样品用时间小于5min，LOD和LOQ分别为0.1和0.25ng/g，回收率为92.7%～104.3%，RSD小于6%。吕海鸾等测定畜产品和水产品中OLQ的残留标示物MQCA残留，用UPLC-MS/MS确证和定量。色谱柱为ACQUITY BEH C18 (50 mm×2.1 mm)，进样量10uL，流动相为0.1%甲酸和0.1%甲酸甲醇溶液，梯度洗脱，流速0.3mL/min，ESI正离子扫描，毛细管电压2.8kV，离子源温度150℃，脱溶剂温度300℃，碰撞气氩气，脱溶剂气流速为480L/h， MRM模式监测，采用外标法定量。MQCA的LOD为0.90～1.8μg/kg，LOQ为3.0～6.0μg/kg，平均回收率均在73.6%～89.0%之间，日内RSD在15%以下，日间CV低于20%。刘正才等采用LC-MS/MS测定动物源食品中OLQ代谢物MQCA残留量。色谱柱为Kinetex C18柱(100mm×3.0mm，2.6um)，流动相为甲醇、乙腈以及0.2%甲酸，梯度洗脱，流速0.30mL/min，柱温35℃，进样量20μL，ESI正离子扫描，MRM模式监测，电喷雾电压4500V，气帘气压力0.172 MPa(氮气)，离子源温度550℃，雾化气压力0.379MPa，辅助气压力0.379 MPao MQCA的LOQ分别为：鰻鱼0.4 μg/kg、虾0.3 μg/kg、猪肉0.5μg/kg、鸡肉0.3ug/kg、牛肉0.5 ug/kg、猪肝0.5 ug/kg，远低于国内外对MQCA的MRLs规定，回收率在60.7%～107%之间，RSD在4.59%～14.9%之间。

Hutchinson等建立了猪肝中QCA和MQCA的LC-ESI-MS/MS确证方法。色谱柱为C18柱(150mm×2.0mm)，流动相为甲醇-乙腈-水-乙酸(10+10+79.6+0.4，v/v)，流速0.2 mL/min，进样体积15μL，质谱源温150℃，ESI+扫描，MRM检测QCA产物离子m/z 102和75，MQCA产物离子m/z145和102，采用稳定氘代同位素内标定量。QCA的CCa和CCβ分别为0.4μg/kg和1.2μg/kg， MQCA分别为0.7μg/kg和3.6μg/kg。Boison等用LC-MS/MS测定猪组织中CBX和OLQ及其代谢物QCA和MQCA残留。色谱柱为Nova-Pak C18 (2.1mm×150mm，4um)，流动相为0.04%甲酸-甲醇，梯度洗脱，流速0.2mL/min，分流，进入质谱流速为0.08 mL/min，ESI 正离子、MRM检测，毛细管电压2.75kV，锥孔电压27V，源温100℃，脱溶剂温度150℃。BDCBX和QCA的LOQ分别为0.05μg/kg和0.5μg/kg，LOD分别为0.025μg/kg和0.3ug/kg；MQCA的LOQ为0.5μg/kg，LOD 为0.3μg/kg；回收率在80%～120%。

Zeng等开发了一种快速测定猪肌肉、肝脏、肾脏中MQX的5个代谢物的LC-MS/MS方法。样品经酸水解，用SPE净化后，进LC-MSMS在ESI正离子源下测定。满足确认所需的两对转化离子，以及可接受的相对离子强度。方法CCa在0.6～2.9μg/kg之间，CCβ介于1.2～5.7μg/kg；回收率为75.3%～107.2%，RSD小于12%。Liu等报道了采用超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)测定猪肝脏中MQX及其代谢物(l-desoxymequindox和BDMQX)的方法。用酸性乙腈提取，Oasis MAX柱净化后，通过UPLC分离，用含0.1%甲酸的甲醇进行梯度洗脱，色谱分析总时间少于8min。ESI-MS/MS在MRM模式下进行数据采集。在2～100μg/kg的添加水平下，方法回收率范围为80%～85%，日内CV小于等于14.48%，日间CV小于等于14.53%；LOD范围为0.58～1.02μg/kg，LOQ范围为1.93～3.40ug/kg。

C.正负离子切换检测

还可以通过质谱电离方式切换，同时检测正负离子。Horie等建立了检测猪肌肉和肝脏中CBX及其代谢物QCA和BDCBX的方法。色谱分离采用Cadenza CD-C18柱(10cm×2mmid.)，流动相为0.01%乙酸-乙腈，梯度洗脱，流速0.2mL/min，LC-ESI-MS测定，SIM模式监测(QCA检测[M-H]，BDCBX检测[M+H]+)。检测浓度在0.01～0.5ng时，呈良好线性，回收率为70.2%～86.3%，LOD均为1ng/g。

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