喹噁啉类药物残留分析技术——净化方法（二）

时间：2023-03-25 00:05:00来源：food栏目：食品快速检测阅读：

喹噁啉类药物残留分析技术——净化方法（二）

[db:作者] / 2022-12-21 00:00

2)固相萃取( solid phase extraction，SPE)

与LLP相比，SPE具有省时省力、经济、节省溶剂、减少溶液乳化、可同时处理多个样品并能自动化的优点，可有效除去样品基质中的干扰物，对被分析物具有很高的浓缩因子，回收率也高。用于净化本类药物的SPE类型主要有MAX、SCX、HLB、C18等，因为待测物的酸性性质，采用MAX净化的文献较多。

A.MAX

Della等测定猪肝脏中QCA，采用酸性水解提取，提取液中QCA经萃取转移至乙酸乙酯，再用0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH7)反萃取，反萃取液过MAX SPE柱净化，依次用0.05mol/L氢氧化钠溶液、甲醇淋洗，用三氟乙酸-甲醇(2+98，v/v)洗脱，衍生化后用GC-MS测定。回收率为90%～102%，CV为1.7%～8.4%。Boison等测定猪肝中CBX代谢物BDCBX和QCA，采用蛋白酶酶解，酶解物加0.3mol/L盐酸10mL酸化提取，提取液离心后上MAX小柱净化，用30mL乙酸钠-甲醇(95+5，v/v)淋洗，用4×3mL二氯甲烷洗脱BDCBX，再用3mL甲酸-乙酸乙酯(2+98，v/v)洗脱QCA，洗脱液吹干转换溶剂后，进LC-MS/MS测定。BDCBX和QCA的LOQ为0.05μg/kg和0.5μg/kg，LOD为0.025ug/kg和0.3μg/kg，回收率在80%～120%之间。

Zhang等测定鱼组织中OLQ代谢物MQCA，样品经2mol/L的盐酸水解后，水解提取液离心后过MAX SPE柱(依次用3 mL甲醇、3mL水活化)净化，用3mL 0.05mol/L乙酸钠-甲醇溶液(90+10，v/v)淋洗，吹干，用3mL含2%甲酸的乙酸乙酯洗脱，洗脱液氮气吹干，流动相复溶后，LC-MS/MS测定。MQCA的LOD和LOQ分别为0.1ng/g和0.25ng/g，回收率为92.7%～104.3%，RSD小于6%。刘正才等测定鱼、虾、猪肉、鸡肉、牛肉、猪肝中OLQ代谢残留标识物MQCA，样品酶解溶液加入0.3 mol/L HCI溶液提取，提取液用正己烷脱脂后，上MAX SPE柱净化，依次用0.05mol/L乙酸钠溶液(pH7.0)-甲醇(19+1，v/v)、水、水-甲醇(4+1，v/v)和甲醇淋洗，用含2%甲酸的乙酸乙酯洗脱，洗脱液吹干，流动相复溶后，LC-MS/MS测定。样品中MQCA的LOQ为0.3～0.5ug/kg，平均回收率在60.7%～107%之间，RSD在4.59%～14.9%之间。余海霞等用碱液水解鱼体内MQCA结合残留物，水解液用酸中和后，上MAX柱净化，待样液全部流出后用含3 mL 0.05mol/L乙酸钠的甲醇溶液淋洗，3mL含2%甲酸的乙酸乙酯溶液洗脱，洗脱液吹干，流动相溶解后，进HPLC测定。

方法回收率为80.5%～86.5%，RSD均小于6%，方法LOD为4.0μg/kg。

Wu等测定动物组织、鱼肉中的QCA和MQCA，0.01mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.0)萃取液用MAX小柱净化，依次用3mL 0.05mol/L氢氧化钠溶液和3mL甲醇淋洗，用3mL甲酸-甲醇(2+98，v/v)洗脱，洗脱液转换溶剂后用HPLC测定。QCA和MQCA的回收率在70%～110%之间，CV小于20%。实验发现，如选用三氟乙酸-甲醇(2+98，v/v)作洗脱液，在色谱测定时会出现明显的干扰峰，而用甲酸替换三氟乙酸，则千扰峰消失，可能是三氟乙酸具有强烈紫外吸收特性所致。林黎等测定牛奶和奶粉中CBX和OLQ代谢物残留，酶解液用0.3mol/L HCI酸化，上清液直接上MAX小柱(分别用3 mL甲醇和3 mL水活化)净化，分别用15mL 0.05mol/L乙酸钠-甲醇(19+1，v/v)、5mL甲醇、3mL水、5mL 0.1mol/L盐酸和3 mL水-甲醇(4+1，v/v)淋洗，抽干后再用2mL乙酸乙酯淋洗，最后用3 mL 2%甲酸-乙酸乙酯洗脱，洗脱液吹干复溶于1mL甲酸-甲醇(1+99，v/v)，用LC-MS/MS测定。牛奶中QCA和MQCA的LOQ为0.5 μg/kg，奶粉为4.0 ug/kg；平均回收率为68.2%～82.5%，CV为3.4%～12%。实验对比了Bond Elute Certify和Oasis MAX两种商用柱的净化效果，后者的净化效果和回收率明显优于前者。

B.SCX

Hutchinson等测定猪肝中QCA残留，用3mol/L氢氧化钠溶液水解组织结合态QCA，水解液用4mL浓盐酸中和，乙酸乙酯萃取，萃取液用0.1mol/L磷酸钠溶液(pH8.0)反萃取，磷酸钠溶液反萃取经盐酸酸化后过SCX柱净化，用15mL 0.1mol/L的盐酸淋洗，用5mL 0.1mol/L的氢氧化钠-甲醇(70+30，v/v)洗脱，洗脱液吹干用流动相复溶，LC-MS/MS测定。回收率为89%～11%，CV为0.15%～10%，CCa和CCβ分别为0.16mg/kg和0.27mg/kg。Hutchinson等测定猪肝中MQCA和QCA残留，蛋白酶解液用浓盐酸酸化提取，提取液用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯萃取液再用0.1mol/L磷酸钠缓冲液(pH8.0)反萃取，取4mL磷酸钠缓冲液(pH8.0)萃取液，加入1mL浓盐酸酸化后，上SCX小柱净化，收集所有流出液，吹干，流动相复溶，LC-MS/MS测定。QCA的CCa和CCβ分别为0.4ug/kg和1.2ug/kg，MQCA的CCa和CCβ分别为0.7μg/kg和3.6ug/kg。

C.C18

梅景良等测定鲤鱼、对虾中OLQ及其代谢物MQCA，盐酸水解液直接过C18 SPE柱净化，依次用5mL甲醇和3mL 0.3mol/L HCI活化小柱，2mL超纯水淋洗，再依次用3mL甲醇和1mL乙腈洗脱，洗脱液氮气吹干后，用0.5mL水-0.5%甲酸水-乙腈-甲醇混合溶液(30+40+5+25，v/v)复溶，离心、过滤后进样检测。OLQ及MQCA的平均回收率分别为74.6%～80.9%和81.0%～86.6%，批内RSD为0.51%～4.47%，批间RSD为0.66%～7.58%；鲤鱼组织中OLQ及MQCA的LOD分别为6μg/kg和10μg/kg，LOQ分别为20ug/kg和35μg/kg；对虾组织中的LOD分别为4.5μg/kg和8 μg/kg，LOQ 分别为15 μg/kg和30 μg/kg。吕海鸾等采用0.2mol/L盐酸提取水产品中MQCA，过C18 SPE柱，依次用2mL水和1 mL甲醇淋洗，吹干，再用3mL甲醇和1mL乙腈洗脱，35℃氮气吹干，残渣用0.5mL复溶溶液涡旋振荡溶解1min，3900r/min离心15min，0.22μm滤膜过滤后，进行HPLC分析。猪肉、猪肝、猪肾、鱼、对虾和蟹中MQCA的LOD依次为0.90μg/kg、1.51μg/kg、0.94μg/kg、1.04μg/kg、1.62μg/kg和1.80μg/kg，LOQ依次为3.00μg/kg、5.02μg/kg、3.13μg/kg、3.46μg/kg、5.40μg/kg、6.00μg/kg；MQCA的平均回收率均在73.6%与89.0%之间，日内RSD在15%以下，日间RSD为20%以下。Li等测定猪肉和肌肉中MQX、QCT及其11种代谢物。乙腈-乙酸乙酯提取，酸化，再用乙酸乙酯萃取，过C18柱净化后超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)测定。方法回收率在69.1%～113.3%之间，日内RSD小于14.7%，日间RSD小于19.2%，LOD在0.05～ 1.0μg/kg之间。

D.HLB

田强兵等建立了水产品中OLQ的测定方法。匀浆后的水产品试样经甲醇溶液提取、正己烷除脂后，用HLB柱净化。4mL甲醇和4mL水活化，10mL提取液上样，依次用4mL 0.02mol/LHCl、0.1mol/L HCI和水淋洗，用3mL体积分数40%甲醇溶液洗脱，HPLC检测。方法LOD和LOQ分别为0.02mg/kg和0.05mg/kg；回收率在78%-99.6%之间，RSD小于7.7%。Horie等用乙腈提取猪肌肉和肝脏中CBX及其代谢物QCA和BDCBX，提取液蒸干后用水复溶，过Oasis HLB柱(60mg)净化，用8mL水洗涤，5mL甲醇洗脱，洗脱液吹干，流动相复溶后，LC-MS/MS测定。QCA和BDCBX的回收率在70.2%～86.3%之间，LOD为1ng/g。Merou等测定猪、牛肌肉和猪肝中QCA和MQCA，酶解上清液加1.5mL 1.2mol/L盐酸酸化，过HLB柱净化，用3mL水淋洗，5mL乙酸～甲醇(2+98，v/v)洗脱，洗脱液再经正相SPE柱净化后，LC-MS/MS测定。CBX、MQCA、QCA的CCa和CCβ范围分别为0.09～0.24μg/kg和0.12～0.41μg/kg，回收率为92%～101%(MQCA、QCA)和60%～62%(CBX)，CV小于12%。

E.其他

本类药物极性相对中等或较高，采用正相SPE吸附剂净化也有研究报道。Aerts等采用甲醇-乙腈提取猪肾脏和肝脏中CBX及其三个脱氧代谢物，猪肌肉、肝脏和肾脏用乙腈-甲醇(1+1，v/v)提取，提取液直接过氧化铝-弗罗里硅土SPE柱(下层8g氧化铝，上层2g弗罗里硅土)净化，收集流出液，蒸干后用水复溶，用异辛烷LLP脱脂后，用HPLC测定。LOD为1～5μg/kg，平均回收率为81%～87%，CV为4%～10%。Merou等测定猪、牛肌肉和猪肝中QCA和MQCA，HLB柱的乙酸-甲醇(2+98，v/v)洗脱液再上氨基SPE柱净化，先用5mL乙酸-甲醇(5+95，v/v)洗脱CBX，再用3.5mL氨水-甲醇(1+10，v/v)洗脱QCA和MQCA，合并所有洗脱液，吹干并复溶于80μL甲醇中，LC-MS/MS测定。CBX、MQCA和QCA的CCa和CCβ范围分别为0.09～0.24μg/kg和0.12～0.41μg/kg，回收率为92%～101%(MQCA、QCA)和60%～62%(CBX)，CV小于12%。

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