镇静剂类药残留分析技术——净化方法（二）

时间：2023-03-25 00:44:52来源：food栏目：食品快速检测阅读：

镇静剂类药残留分析技术——净化方法（二）

[db:作者] / 2022-12-20 00:00

2)固相萃取( solid phase extraction，SPE)

A.巴比妥类

巴比妥类药物净化常用的SPE柱有HLB和C18等。

Wang等分析动物和水产品可食组织中的巴比妥类等药物，采用HLB净化。提取液溶解在乙酸铵缓冲液-甲醇(9+1，v/v)中上样，依次用乙酸铵缓冲液-甲醇(9+1，v/v)、正已烷、正已烷-乙酸乙酯(95+5，v/v)淋洗，最后用5 mL正已烷-乙酸乙酯(50+50，v/v)洗脱，回收率为79.6%～108%。我国检验检疫行业标准SNT 2217-2008也采用类似条件净化方法。反相SPE净化分别采用水相和低极性有机相淋洗可充分发挥SPE柱的保留机制，净化提取液中的极性和非极性杂质，降低质谱分析的基质效应。

Zhao等测定猪组织中3种巴比妥类药物，乙腈提取液浓缩后用5 mL 0.1 mol/L K2HPO4(pH 7.4)溶解，过C18 SPE柱净化，依次用5 mL正已烷和5 mL正已烷-乙酸乙酯(95+5，v/v) 淋洗，正己烷-乙酸乙酯(7+3，v/v)洗脱。LOQ在猪肝中不高于2.20 μg/kg，猪肾中不高于3.35 μg/kg；4种药物回收率为68%～90%。陈建虎等测定血液中巴比妥、异戊巴比妥、速可眠和苯巴比妥，用酸性缓冲液提取后，过C18 SPE柱，再用5mL水清洗，氮气吹干后，用2 mL三氯甲烷以0.5 mL/min流速洗脱，LOD为0.04～0.10μg/mL，回收率为80.3%～92.6%。戴晓欣等14测定水产品中苯巴比妥，C18 柱依次用6 mL水和6 mL体积分数为10%的乙腈溶液淋洗，用8 mL二氯甲烷洗脱，回收率在80.49%～ 102.42%之间，RSD 为1.52%～ 10.15%，LOD为10 μg/kg，LOQ为30 μg/kg。

B.苯二氮卓类

苯二氮卓类药物的SPE净化柱主要包括C18、HLB、Phenyl 柱等。

汪丽萍等分析猪肉中的苯二氮卓类镇静剂，提取物用K2HPO4溶解后，过C18固相萃取柱，依次用5 mL蒸馏水和10 mL正己烷淋洗，用正已烷-丙酮(5+5，v/v) 洗脱。艾司唑仑、阿普唑仑、三唑仑的回收率为60%～115%，RSD为3.8%～9.7%，LOD为10 μg/kg。Wang 等用类似C18填料特性的多壁碳纳米管净化猪肉中的地西泮、艾司唑仑、阿普唑仑和三唑仑。研究发现多壁碳纳米管填料对上述药物吸附选择性比C18更高，效果更好，4种药物回收率为75%～104%，CV为1.3%～ 10%，地西泮LOD为2 ug/kg，艾司唑仑、阿普唑仑和三唑仑LOD为5 μg/kg。钱晓东等建立了LC-MS MS测定鱼类样品中地西泮及其代谢物分析方法。样品用1%氨化乙酸乙酯提取，HLB净化，用10mL水-乙腈(9+1，v/v)上样，待样液全部流出后，用5 mL水淋洗，抽干，10mL乙酸乙酯洗脱。方法LOQ均为1 μg/kg，回收率为82.1%～119.0%， RSD为2.2%～15.0%。于慧娟等检测水产品中地西泮及其代谢物去甲地西泮、替马西泮和奥沙西泮，残留物用乙腈-水溶解，过HLB SPE柱净化，分别用5 mL 5%甲醇-水和5mL水淋洗，再用10 mL乙酸乙酯洗脱。待测药物的平均回收率为82.1%～ 119.0%。

Borrey等用Bond Elute Phenyl柱提取净化尿中的15种苯二氮卓类药物。尿液经酶水解后溶解于PBS上样，依次用水、乙腈-水(7+3，v/v)淋洗，用甲醇洗脱，吡啶-乙酸酐衍生化后，进行GC-MS测定，各类药物提取率达80%以上，LOD 为1.0～1.7ng/mL。

Lee等测定毛发中的苯二氮卓类药物，甲醇提取液蒸干后用磷酸盐缓冲液(pH6)复溶，上CLEAN SCREEN小柱净化，依次用水、0.1 mol/L盐酸溶液、正已烷淋洗，用二氯甲烷-异丙醇-氨水(78+20+2，v/v) 洗脱，GC-MS测定。CLEAN SCREEN以硅胶为基质的共聚物为填料，硅胶表面聚合有独特的疏水和季胺离子交换官能团，类似于阳离子交换萃取。地西泮、劳拉西泮、去甲地西泮、奥西泮、替马西泮的LOD为5μg/g，咪达唑仑和唑吡坦的LOD为10μg/g；LOQ为10～20μg/g，回收率71%～103%。

C.吩噻嗪类

吩噻嗪类药物SPE净化常用的填料有MCX、硅藻土、HLB、C18和碱性氧化铝等。

Cheng等用MCXSPE柱净化猪组织中氯丙嗪、异丙嗪、地西泮和甲喹酮残留。样品溶解在0.1mol/L hCl-乙腈(2+98，v/v)中上样，依次用3mL 0.1mol/L hCl和2mL甲醇淋洗，用2mL氨水-甲醇(2+98，v/v)洗脱。GC-MS测定，回收率为87.6%-106.8%。研究还发现，用HLB净化，氯丙嗪回收率过低；用C18小柱净化，氯丙嗪和异丙嗪回收率过低；最后选择MCX小柱。

Holland等将肾脏中赛拉嗪及其代谢物(2，6-二甲基苯胺)的氯仿提取液直接用硅藻土SPE净化。牛肾中塞拉嗪平均回收率为78.3%，CV为9.51%；2，6-二甲基苯胺回收率为87.2%，CV为9.61%；猪肾中赛拉嗪回收率为80.8%，CV为7.33%；2，6-二甲基苯胺回收率为86.7%，CV为7.10%。

李春风等建立了水产品中包括氯丙嗪、乙酰丙嗪、丙酰丙嗪、异丙嗪、甲苯噻嗪等5种吩噻嗪类药物的残留分析方法。用HLB柱净化，依次用水和10mmol/L硫酸进行淋洗，用乙腈洗脱。LOQ为0.5ng/g，总体平均回收率为75.7%～87.7%，RSD为9.0%～15.2%。

路平等测定猪肝中的氯丙嗪，用C18柱对其进行净化处理。用2mL乙腈活化，上样后用2mL水淋洗，氨化乙酸乙酯洗脱，洗脱液氮气吹干后，用乙酸乙酯进行复溶，测定。组织中平均回收率为76.4%～118.6%，CV为2.2%～19.9%，LOQ为0.5～2.0μg/kg。

洪月玲等用乙腈提取猪肉及虾肉中氯丙嗪后，提取液蒸干残留物用2mL甲醇溶解，过碱性氧化铝柱萃取净化，收集流出液直接测定，LOD为4ug/kg，回收率为80%～101%。

D.丁酰苯类

丁酰苯类药物属碱性，常用离子交换柱净化。

Adam等测定猪肝脏中的阿扎哌酮和阿扎哌醇，乙腈提取液用氯化钠缓冲液稀释，过BondElut Certify阳离子交换SPE柱净化，依次用0.1%乙酸、甲醇淋洗，用2%氨水-乙酸乙酯洗脱。方法LOD为10μg/kg，回收率分别为88.2%和91.2%。Cerkvenik-Flajs等测定猪肾中阿扎哌隆和阿扎哌醇，乙腈提取液加乙酸酸化，上MCX固相萃取柱净化，分别用水和甲醇淋洗，用三乙胺-甲醇(5+95，v/v)洗脱。方法回收率分别为88.2%和91.2%；阿扎哌隆和阿扎哌醇的CCa分别为1.1ug/kg、1.2ug/kg；LOQ分别为5μg/kg、10μg/kg。

E.多种类

朱坚等在分析猪肉中地西泮和氯丙嗪的残留时，乙腈提取液中加入20%氯化钠水溶液，用0.01mol/L硫酸调节pH4.8～5.0，过HLB净化，用15mL酸性乙腈洗脱。猪肾中地西泮的平均回收率为76.7%～93.4%，氯丙嗪的平均回收率为99.4%～101.6%；猪肉中地西泮的平均回收率为80.1%～85.2%，氯丙嗪的平均回收率为95.5%～96.4%。Delahaut等测定猪肌肉和肾脏中吩噻嗪类(氯丙嗪、乙酰丙嗪、丙酰丙嗪)、丁酰苯类(阿扎哌隆和阿扎哌醇)残留。乙腈提取液用10%氯化钠溶液稀释后，过HLB柱，用0.01mol/L硫酸溶液淋洗后，用2mL乙腈洗脱净化。方法回收率均大于83.3%。

Zhang等用氨基柱净化，建立了动物组织中包括11种镇静剂(苯巴比妥、艾司唑仑、咪达唑仑、地西泮、硝西泮、癸氟奋乃静、氯丙嗪、乙酰丙嗪、氟哌啶醇、塞拉嗪、阿扎哌醇)在内的30种药物的残留分析方法。猪、牛肾脏、肝脏和肌肉的乙腈提取液吹干后溶解于0.5mL甲醇中，上氨基柱净化，不经淋洗，直接用5mL甲醇-丙酮(1+1，v/v)和5mL丙酮洗脱。猪肌肉、肾脏、肝脏中11种镇静药物回收率在76.4%～118.6%之间，CV为2.2%～19.9%，LOQ为0.5～2.0μg/kg。通过比较C18、HLB和氨基柱的净化效果，表明氨基柱更适宜。用C18、HLB净化，氯丙嗪、氟吩噻嗪、地西泮回收率均低于10%。

Schuh等描述了一种动物性食品(如肉类和内脏)中8种兽用镇静剂(包括氟哌啶醇、氯丙嗪和甲苯噻嗪等)的分析方法。采用乙腈提取，正已烷脱脂，用MCXSPE柱(6mL，500mg)净化，最后用正己烷在碱性条件下萃取，萃取液再用LC-MS/MS分析。该方法被用来测定牛和猪肝脏加标样品中镇静剂残留，LOD为0.1～0.5μg/kg，CCβ优于欧盟基准实验室建议的10～ 50 μg/kg的检测水平。

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