磺胺类药物残留分析技术（三）

时间：2023-03-25 08:06:23来源：food栏目：食品快速检测阅读：

磺胺类药物残留分析技术（三）

[db:作者] / 2022-12-08 00:00

(2)净化方法

SAs常用的净化方法主要有液液分配法(LLP)、固相萃取法(SPE)、QuEChERS、分子印迹技术(MIP)、免疫亲和色谱法(IAC)及在线自动净化法等。

1)液液分配(liquid liquid partition，LLP)

LLP通过分析物在互不相溶的两相中的溶解度和分配系数的不同，达到将分析物和杂质分离的目的。LLP时容易产生乳化现象，在提取时应当注意振荡速度，按“缓-快-缓”进行操作，同时，在LLP时常加入无水硫酸钠以提高回收率，并减少杂质的浸出。Potter等建立了一种快速分析鱼组织中17种Sas和2种磺胺增效剂的LC-MS/MS方法。分析物用乙腈-水(50+50，v/v)提取，离心，先加入正己烷LLP净化除脂，再加入氯仿LLP提取净化，蒸干，复溶后进样检测。该方法LOD在0.1～0.9ng/g之间，回收率在30%～100%之间，RSD在4%～23%之间。徐维海等建立了HPLC法同时分离并检测鱼、虾等水产品中14种SAs。样品经无水硫酸钠脱水后，乙腈提取药物，再用乙腈饱和正己烷LLP脱脂净化，HPLC检测。该方法的LOD为0.01～0.02mg/kg，样品的加标回收率为66%～92%。Stoev等建立了肉和肾脏中10种常用SAs的HPLC-FLD定量分析方法。先用乙酸乙酯提取，用丙酮再提取一次，蒸干后，用水-二氯甲烷LLP净化3次，有机相蒸干复溶后，进HPLC测定。在1μg/kg、5ug/kg、10ug/kg添加浓度，方法平均回收率分别为64%、68%和75%，LOQ为0.5～1μg/kg。

2)固相萃取(solid phase extraction，SPE)

SPE利用吸附剂将液体样品中的目标化合物吸附，使其与样品基体、干扰物质分离，然后通过洗脱液洗脱或加热解吸附，分离和富集目标物。与传统的LLP相比，SPE不需要大量有机溶剂，不产生乳化现象，可净化很小体积的样品，是目前兽药残留分析中样品前处理的主流技术。动物源食品中SAs净化可以用的SPE填料类型较多，包括正相柱(硅胶柱、硅藻土柱、碱性氧化铝柱)、反相柱(C18柱、HLB柱)和离子交换柱(阳离子交换柱、阴离子交换柱)，另外，还可联合用柱。

A.硅胶柱

Alaburda等引建立了牛奶中STZ、SMZ和SDM的残留检测方法。采用二氯甲烷提取，硅胶固相苯取柱净化，提取物经荧光胺衍生化后，用反相HPLC-FLD检测。方法LOD为0.3μg/L，STZ和SMZ的LOQ为1μgL，SDM为2.5μg/L，变异系数(CV)为4.4%～6.6%，STZ、SMZ和SDM的平均回收率分别为63.2%、91.2%和63.2%。Shao等测定猪肉、猪肝、猪肾中17种SAs时用无水硫酸钠除水，乙腈提取，正己烷除脂，提取液蒸干后，氯仿-正己烷(1+9，v/v)复溶，Sep-Pak硅胶柱(正己烷活化)净化，依次用甲醇-丙酮(1+1，v/v)和丙酮洗脱分析物，LC-MS/MS检测。方法回收率在52%～120%之间，LOD在0.01～1.0ug/kg之间。董丹等采用类似技术建立了鸡肉中17种SAs残留量的LC-MS/MS测定方法。样品经过匀浆、乙腈提取、正己烷脱脂、硅胶SPE柱净化后进行LC-MS/MS分析。以稳定同位素C-磺胺二甲基嘧啶作为内标，采用多反应监测(MRM)定量。方法LOD为0.02～1ug/kg，17种SAs的加标回收率为52.3%～124.9%，RSD为1.0%～17.6%。

B.碱性氧化铝柱

李俊锁等建立了鸡肝组织中中7种SAs的HPLC方法。样品加入无水硫酸钠后用乙腈提取，正己烷LLP脱脂和碱性氧化铝SPE柱净化，乙腈-水(75+25，v/v)洗脱，HPLC测定。在0.05～0.5mg/kg添加浓度范围内，该方法回收率在68.8%～100.0%之间，CV在1.3%～12%之间：LOD为0.01～0.03mg/kg，LOQ低于0.05mg/kg。我国农业部标准《动物源食品中磺胺类药物残留的检测方法-高效液相色谱法》中组织样品经乙腈提取，正已烷LLP分配，提取液浓缩至近干，用3mL乙腈。水(95+5，v/v)溶解残留物，再过碱性氧化铝SPE柱，吹干，用5mL乙腈-水(75+25，v/v)洗脱，用0.017mol/L磷酸定容至10mL，过0.45um微孔滤膜后，进HPLC测定。该方法在鸡肌肉和肝脏组织中的LOD为10～20ug/kg，回收率在80.9%～100.4%之间，室内CV为10.2%，室间CV为18.5%。

C.弗罗里硅土柱

Granja等建立了蜂蜜中ST、SM2和SDM的残留分析方法。蜂蜜样品采用30% NaCl溶解，再用二氯甲烷LLE提取，用弗罗里硅土SPE柱净化，HPLC检测，磺胺吡啶作为内标定量。ST、SM2和SDM的LOD分别为3ug/kg、4ug/kg、5ug/kg；在100ug/kg添加水平，ST、SM2和SDM的平均回收率分别为61.0%、94.5%和86.0%。

D. C18柱

de la Cruz等采用LC-MS/MS检测鸡蛋中的SDM、SMZ、SQXNa、SAM、SCP、SMR、SMTZ、SMXZ、STZ和SMPD等10种SAs。以SDZ为内标，乙腈提取后旋蒸至1mL，再用乙腈和水预处理的C18 SPE柱净化，乙洗脱，蒸干复溶后，用LC-MS/MS测定。该方法回收率为87%～116%，RSD为8.5%～27.2%；CCa在101.0～122.1ng/g之间，CCp在114.5～138.8ng/g之间。Heller等的同时建立鸡蛋中15种SAs的HPLC-UVD和LC-离子阱质谱(MSn)分析方法。样品用乙腈提取，经C18 SPE柱净化后，用HPLC和LC-MS2测定。该方法的确证浓度可以达到5～10ng/g，HPLC的定量范围在50～200ppb之间。Krivohlavek等建立了一种快速分析蜂蜜中11种SAs的残留检测方法。蜂蜜样品经匀浆提取，用C18 SPE柱净化后，采用LC-MS测定，方法LOD可达到25ug/kg。Zou 等建立了猪肉、猪肝、鸡肉、牛肉中12种SAs的HPLC方法。组织样品用乙腈提取，经9-芴基甲基氯甲酸酯(FMOC-Cl)衍生化后，过C18 SPE柱净化，HPLC紫外检测器(UVD)测定。方法添加回收率在70%以上，RSD低于13.7%，LOD在3～5ug/kg之间。

E.HLB柱

郭根和等采用HLB柱净化了对虾样品中的5种SAs。样品用二氯甲烷提取，氮气吹干后用3mL磷酸盐缓冲液-乙腈(95+5，v/v)复溶，过HLB柱净化，5mL甲醇洗脱，HPLC-UVD检测。方法LOD达到2ug/kg，相关系数在0.9997以上：在100ugkg、50ug/kg、10μg/kg三个添加水平，方法回收率在71%～90%之间，RSD<10%。Li等开发了虾中18种兽药(包括SQX等SAs)的LC-MSn分析方法。均质后的样品用5%三氯乙酸提取，提取液用HLBSPE柱净化，LC-MSn测定，SAs的确证浓度在10～20ng/g之间。Vargas Mamani等建立了牛奶中SM2、SQX和SMZ的残留分析方法。样品经蛋白沉降后，用HLBSPE柱净化，采用HPLC-DAD测定，方法LOQ均低于药物的MRL。

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