磺胺类药物残留分析技术（五）

时间：2023-03-25 08:02:55来源：food栏目：食品快速检测阅读：

磺胺类药物残留分析技术（五）

[db:作者] / 2022-12-08 00:00

3)免疫亲和色谱(immunoaffinity chromatography，IAC)

IAC以抗原抗体的特异性、可逆性免疫结合反应为基础，当含有待测组分的样品通过IAC柱时，固定抗体选择性地结合待测物，其他不被识别的样品杂质则不受阻碍地流出IAC柱，经洗涤除去杂质后将抗原-抗体复合物解离，待测物被洗脱，样品得到净化。其优点在于对目标化合物的高效、高选择性保留能力，特别适用于复杂样品痕量组分的净化与富集。

Li等用SAs多克隆抗血清制成IAC柱来净化猪肉中的SAs残留。在4-氨基苯磺胺N1位连接间隔臂制得抗SAs特异性抗体，与免疫吸附剂混合制备IAC柱，用于净化猪肉中SMM、SDM和SQX。样品用甲醇-水(8+2，v/v)提取，过IAC净化后，用HPLC-UVD检测。该方法的LOD为1～2μg/kg：在10～100ug/kg添加浓度内，回收率为70.8%～94.1%，RSD在3.4%～12.9%之间。龚明辉利用抗SM2簇特异性单克隆抗体制备了lAC柱，对鸡肉中的SM2、SDM和SM1进行测定。利用高亲和力SM2单克隆抗体与溴化氰活化的Sepharose4B进行偶联，制备免疫亲和吸附剂，对3种SAs的动态柱容量为195～16181ng/mL gel，绝对柱容量为335～404ng/mg lgG。该IAC柱每三天使用一次，重复12次后，SM2的柱容量仍能达到795ng/mL gel，满足SAs残留分析的要求。鸡肉样品经甲醇水(8+2，v/v)提取，取一半提取液，加35mLPBS稀释，过IAC柱净化，用4mL甲醇洗脱，HPLC-UVD检测。该方法的LOD为3ug/kg，在10～50ug/kg添加浓度，回收率为75.4%～98.5%，RSD小于7.4%。Li等以SMZ为半抗原制备单克隆抗体，该单克隆抗体对6种SAs的交差率在31%～112%之间，与溴化氰活化的Sepharose4B进行偶联，获得的免疫亲和吸附剂来制备IAC柱，该IAC柱对13种喹诺酮和6种SAs具有吸附性。用该IAC柱净化猪肉和鸡肉中的6种SAs，LC-MS/MS检测，方法回收率为72.6%～107.6%，RSD为11.3%～15.4%，LOQ为0.5～3ug/kg。

4)QuEChERS(Quick，Easy，Cheap，Effective，Rugged，Safe)

QuEChERS是由美国农业部Anastasiades教授于2003年开发的，一种用于农产品检测的快速样品前处理技术。其原理与HPLC和SPE相似，利用吸附剂填料与基质中的杂质相互作用，吸附杂质从而达到除杂净化的目的。具有回收率高，精确度好：可分析的化合物范围广；分析速度快；溶剂使用量少，污染小；操作简便；装置简单等优势。

李锋格等建立了一种基于QuEChERS前处理技术的UPLC-MS/MS残留分析方法，用于测定鸡肝中12种SAs、19种喹诺酮类和8种苯并咪唑类药物及其代谢物。样品用1%乙酸乙腈溶液提取，4.5mL提取液中加入200mg氨基(NH2)吸附剂，涡旋2min，4500r/min离心10min，移取3mL上清液氮气吹干，加入1mL甲醇-DMSO-水(10+50+40，v/v)复溶，加入2mL正己烷脱脂，过滤后LC-MS/MS测定。39种药物在5～100ug/kg添加浓度范围内线性良好(2>0.98)；在10～50ug/kg添加水平范围内，平均回收率为72%～121%，RSD为1.5%～23.4%；39种药物的LOD为5μg/kg，LOQ为10ug/kg。曲斌等引也建立了一种以QuEChERS方法作为样品前处理技术的UPLC-MS/MS方法，测定猪肝中20种SAs残留。猪肝样品以SDM-D6为内标，置于DisQuE萃取管(50mL，内含4g硫酸镁、1g氯化钠、1g柠檬酸三钠二水结晶盐、0.5g柠檬酸氢二钠半水结晶盐)中，用乙腈提取，上清液加入DisQuE净化管(15mL，内含900mg硫酸镁、150mg PSA、150mg C18)净化，上清液蒸干复溶后，用UPLC-MS/MS测定。在10～200ugkg范围内，各药物均呈良好的线性关系，高中低浓度回收率在70%～115%之间，精密度小于15%。Posyniak等开发了一种快速、低成本分析鸡肉中6种SAs的HPLC方法。样品用乙腈提取，1mL提取液中加入25mgC18吸附剂，混合振荡，上清液蒸干后用pH3.5乙酸缓冲液复溶，荧光胺衍生化，HPLC-FLD测定。该方法回收率超过90%，LOD在1～5μg/kg之间。

5)分子印迹技术(molecular imprinting technology，MIT)

MIT利用模板分子(印迹分子)与聚合物单体接触时会形成多重作用点，通过聚合过程这种作用就会被记忆下来，当模板分子除去后，聚合物中就形成了与模板分子空间构型相匹配的具有多重作用点的空穴，这样的空穴将对模板分子及其类似物具有选择识别特性，以此分子印迹聚合物(MIP)作为吸附净化材料，建立选择性样品处理方法。

Xu等制备了一种新型的SM2的MIP-涂层搅拌棒，该MIP的涂层厚度大约为20um，RSD为6.7%。分别通过电子显微镜、红外光谱扫描、热重分析和耐溶剂性对MIP进行研究，与非印迹聚合物(NIP)-涂层作比较，对MIP-涂层的吸附容量和选择性进行了详细的评价，MIP-涂层表现出较高的吸附能力和选择性。MIP-涂层的饱和吸附量是甲苯中NIP涂层的4.6倍以上，经MIP-涂层搅拌棒吸附萃取后，可以检测到0.2μg/L的SM2。同时，该MIP-涂层对模板类似物也具有选择性吸附能力。

以此建立了采用MIP-涂层搅拌棒吸附萃取生物样品中8种SAs的HPLC测定方法，并对萃取条件(萃取溶剂、萃取时间、解吸溶剂、解吸时间和搅拌速度)进行了优化。该方法的线性范围分别为1.0～100μg/L，LOD为0.20～0.72ugL，已成功应用于猪肉、猪肝和鸡肉样品的分析。

6)在线自动净化(automate online clean up)

在线自动净化具有SPE的高富集性，同时具有提取时间少、有机溶剂用量少和重现性好等优点。

Naoto等开发了鸡蛋中SMZ、SMM、SDM和SQ的在线自动分析方法。鸡蛋样品采用Ultrafree-MC/PL离心式超滤系统处理，以MightysilRP-4GP作为色谱柱，流动相为28%乙醇溶液，光电二极管阵列检测器(PDA)检测。一个样品的分析时间小于30min，乙醇的用量小于5mL。在添加浓度0.1ppm、0.2ppm、0.4ppm和1.0 ppm水平，方法回收率优于80.9%，RSD在1.3%～4.7%之间；SMZ的LOQ为0.060ppm，SMM为0.045ppm，SDM为0.044 ppm，SQ为0.093。Pereira等169建立了同时在线净化检测牛奶中SMX和TMP的二维HPLC法。牛奶样品离心后，取15uL直接注入柱切换HPLC系统，先过RAMC18-BSA柱，0～5min用0.01mol/L pH6.0磷酸盐缓冲液-乙腈(95+5，v/v)冲洗，去除蛋白，5min 后用0.01mol/L pH6.0磷酸盐缓冲液-乙腈(83+17，v/v)冲洗，将分析物冲入C18分析柱；再以0.01mol/L pH5.0磷酸盐缓冲液-乙腈(82+18，v/v)为流动相，分离分析，UVD在265nm处检测。SMX和TMP的线性范围分别为25～800ng/mL和50～400ng/mLLOD分别为15ng/kg、25ng/kg；不同浓度样品添加回收率为94.4%～103.5%，CV小于15%。Fang等建立了在线SPE-HPLC检测方法，可同时检测鸡蛋、猪肉中的SM1；等10种SAs。HPLC原有的进样六通阀被替换为在线的预浓缩柱，SAs在柱上富集，然后被流动相洗脱。整个样品分析过程在35min内完成。混合标准溶液浓度为1ng/mL时，方法CV在2.5%～7.8%之间：添加浓度为4ugkg、6ug/kg、8ug/kg时，鸡蛋的回收率为69.5%～81.47%，猪肉的回收率为66.35%～85.59%。

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