液相色谱-串联质谱法测定牛奶和奶粉中4种头孢菌素的残留量

[db:作者] / 2022-12-09 00:00

5.2.7.1 适用范围

牛奶和奶粉中头孢匹林、头孢氨苄、头孢洛宁、头孢喹肟残留量的液相色谱-串联质谱测定。牛奶的方法检出限：头孢匹林、头孢氨苄、头孢洛宁、头孢喹肟为4.0μg/kg；奶粉的方法检出限为：头孢匹林、头孢氨苄、头孢洛宁、头孢喹肟为32μg/kg。

5.2.7.2 方法原理

牛奶和奶粉中头孢匹林、头孢氨苄、头孢洛宁、头孢喹肟残留，用乙腈、磷酸盐缓冲溶液提取，固相萃取柱净化，液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。

5.2.7.3 试剂和材料

甲醇、乙腈：色谱纯；磷酸二氢钠(NaH2PO4)、氢氧化钠、乙酸、正已烷：优级纯。

乙腈-水溶液(3+1，v/v)：量取60mL乙腈和20mL水充分混合。乙腈饱和的正己烷：取100mL正已烷和50mL乙腈于250mL分液漏斗中，振摇1min，静置分层后，弃掉乙腈。5mol/L氢氧化钠溶液：称取20g氢氧化钠，用水溶解，定容至100mL。0.10mol/L磷酸二氢钠缓冲溶液：称取12.0g磷酸二氢钠，用水溶解，定容至1000mL，然后用氢氧化钠溶液调节至pH8.5。

头孢匹林、头孢氨苄、头孢洛宁、头孢喹肟标准物质纯度≥99%。

1.0mg/mL四种头孢菌素标准储备溶液：准确称取适量的每种标准物质，分别用水配制成浓度为1.0mg/mL的标准储备溶液。储备液贮存在-18℃冰柜中。

四种头孢菌素标准混合工作溶液：根据需要吸取适量的每种头孢菌素标准储备溶液，用水制成适当浓度的混合标准工作溶液。

OasisHLB固相萃取柱或相当者：500mg，6mL。使用前依次用5mL甲醇、5mL水和10mL磷酸二氢钠缓冲溶液预处理，保持柱体湿润。

5.2.7.4仪器和设备

液相色谱-串联四极杆质谱仪，配有电喷雾离子源；分析天平：感量0.1mg、0.01g；固相萃取真空装置；贮液器：50mL；微量注射器：25μL，100μL；均质器；高速冷冻离心机：带有50mL具塞离心管，转速达到10000r/min以上；刻度样品管：5mL，精度为0.1mL；旋转浓缩仪；氮气浓缩仪。

5.2.7.5样品前处理

(1)试样制备

从全部样品中取出有代表性样品约1kg，充分混匀，均分成两份，分别装入洁净容器内。密封后作为试样，标明标记。在抽样和制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。将试样于-18℃保存。

(2)试样溶液的提取

a.牛奶：称取5g试样(精确到0.01g)置于50mL离心管中，加入20mL乙腈，使用均质器均质1min，提取液使用高速冷冻离心机在10℃10000r/min离心10min，把上层提取液移至另一离心管中。用15mL乙腈-水溶液重复提取一次，合并两次的提取液，并加入10mL乙腈饱和的正己烷，振荡1min，弃掉正己烷。把提取液移至100mL鸡心瓶中，在40℃用旋转浓缩仪旋转蒸发除去乙腈。

b.奶粉：称取0.5g试样(精确到0.01g)置于50mL离心管中，加入4.0mL水，使奶粉充分溶解，加入20mL乙腈，使用均质器均质1min，提取液使用高速冷冻离心机在10℃ 10000r/min离心10min，把上层提取液移至另一离心管中。用15mL乙腈水溶液重复提取一一次，合并两次的提取液，并加入10mL乙腈饱和的正己烷，振荡1min，弃掉正己烷。把提取液移至100mL鸡心瓶中，在40℃用旋转浓缩仪旋转蒸发除去乙腈。

(3)试样溶液的净化

向已除去乙腈的样品溶液中加入20mL磷酸二氢钠缓冲溶液，然后用氢氧化钠溶液调节至pH=8.5。把样品提取液移至下接OasisHLB固相萃取柱的贮液器中，以3mL/min的流速通过固相萃取柱，先用5mL磷酸二氢钠缓冲溶液洗涤鸡心瓶并过柱，再用2mL水洗柱，弃去全部流出液。用2mL乙腈洗脱，收集洗脱液于刻度样品管中，在40℃氮气浓缩仪吹干，用2mL水溶解残渣，摇匀后，过0.2um滤膜，供液相色谱-串联质谱仪测定。

(4)空白样品添加标准混合工作溶液的制备

a.牛奶分别准确移取适量四种头孢菌素标准混合工作溶液，添加到5.0g样品中，按照上述步骤操作，制得头孢匹林、头孢氨苄、头孢洛宁、头孢喹肟浓度分别为4.0μg/kg、8.0μg/kg、16ug/kg、40μg/kg四个样品添加标准混合工作溶液，供液相色谱-串联质谱仪测定。

b.奶粉分别准确移取适量四种头孢菌素标准混合工作溶液，添加到0.5g样品中，按照上述提取净化步骤操作，制得头孢匹林、头孢氨苄、头孢洛宁、头孢喹肟浓度分别为32ug/kg、64ug/kg、128μg/kg、320μg/kg四个样品添加标准混合工作溶液，供液相色谱-串联质谱仪测定。

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