液相色谱-串联质谱法测定动物源食品中硝基呋喃类代谢物残留量

时间：2023-03-25 04:34:01来源：food栏目：食品快速检测阅读：

液相色谱-串联质谱法测定动物源食品中硝基呋喃类代谢物残留量

[db:作者] / 2022-12-13 00:00

7.2.1.1 适用范围

本方法适用于猪肉、牛肉、鸡肉、猪肝、水产品(鱼类、虾蟹类和贝类)、牛奶、奶粉和蜂蜜中呋喃它酮代谢物(5-吗啉甲基-3-氨基-2-恶唑烷基酮，AMOZ)、呋喃西林代谢物(氨基脲，SEM)、呋喃妥因代谢物(1-氨基-2-内酰脲，AHD)和呋喃唑酮代谢物(3-氨基-2-恶唑烷基酮，AOZ)残留量液相色谱-串联质谱测定。方法检出限：猪肉、牛肉、鸡肉、猪肝、水产品(鱼类、虾蟹类和贝类)中AMOZ、SEM、AHD和AOZ的检出限均为0.5μg/kg；牛奶中AMOZ、SEM、AHD和AOZ的检出限均为0.2μg/kg；奶粉中AMOZ、SEM、AHD和AOZ的检出限均为1.6μg/kg。蜂蜜中AMOZ和AOZ的检出限为0.2μg/kg；SEM和AHD的检出限为0.5ug/kg。

7.2.1.2 方法原理

猪肉、牛肉、鸡肉、猪肝、水产品(鱼类、虾蟹类和贝类)试样中残留的硝基呋喃类代谢物在酸性条件下用2-硝基苯甲醛衍生化，用OasisHLB或性能相当的固相萃取柱净化。电喷雾离子化，液相色谱-串联质谱检测。用外标法或同位素标记的内标法定量。

牛奶或奶粉试样用三氯乙酸水解并脱蛋白，硝基呋喃类代谢物在酸性条件下用2-硝基苯甲醛衍生化，用OasisHLB或性能相当的固相萃取柱净化。液相色谱-串联质谱仪(ESI+)检测。用内标法或外标法定量。

蜂蜜试样中残留的硝基呋喃类抗生素代谢物在酸性条件下用2-硝基苯甲醛衍生化，用OasisHLB或相当的固相萃取柱净化。电喷雾离子化，液相色谱-串联质谱检测，外标法定量。

7.2.1.3 试剂和材料

甲醇、乙腈、乙酸乙酯：色谱纯。磷酸氢二钾(K2HPO4)、乙酸、二甲亚砜、盐酸、氢氧化钠：优级纯。2-硝基苯甲醛(C7H5NO3，2-NBA)：优级纯，含量≥99%。

磷酸氢二钾溶液：0.1mol/L。称取17.4g磷酸氢二钾，用水溶解，定容至1000mL。

盐酸：0.2mol/L。量取17mL浓盐酸用水定容至1000mL。

氢氧化钠溶液：1mol/L。称取40g氢氧化钠，用水溶解，定容至1000mL。

衍生剂：含2-硝基苯甲醛0.05mol/L。称取0.075g 2-硝基苯甲醛溶于10mL二甲亚砜，现用现配。

样品定容溶液：10mL乙腈，0.3mL乙酸，用水稀释到100mL。

四种硝基呋喃代谢物标准物质：纯度均≥99%。

四种硝基呋喃代谢物内标标准物质：5-吗啉甲基-3-氨基2-懸唑烷基酮的内标物，Ds-AMOZ；氨基脲的内标物，13C15N-SEM；1-氨基-2-内酰脲的内标物，13C3-AHD；3-氨基-2-恶唑烷基酮的内标物，D4-AOZ。四种内标标准物质的纯度均≥99%。

四种硝基呋喃代谢物标准贮备溶液：1.0mg/mL。称取适量的四种硝基呋喃代谢物标准物质，分别用甲醇稀释成1.0mg/mL的标准贮备液。避光保存于-18℃冰柜中，可使用6个月。

四种硝基呋喃代谢物混合标准溶液：0.1μg/mL。吸取适量四种硝基呋喃代谢物的标准贮备溶液，用甲醇稀释成0.1μg/mL的混合标准溶液，避光保存于-18℃冰柜中，可使用3个月。

四种硝基呋喃代谢物内标标准贮备溶液：1.0mg/mL。称取适量的四种硝基呋喃代谢物内标标准物质，分别用甲醇配成1.0mg/mL的标准贮备液。避光保存于-18℃冰柜中，可使用6个月。

四种硝基呋喃代谢物内标标准溶液：0.1μg/mL移取适量的四种硝基呋喃代谢物内标标准贮备溶液，用甲醇稀释成0.1ug/mL的混合内标标准溶液，避光保存于-18℃冰柜中，可使用3个月。

OasisHLB固相萃取柱：60mg，3mL。使用前分别用5mL甲醇和10mL水预处理，保持柱体湿润。

5-甲基吗啉-3-氨基2-唑烷基酮、氨基脲、1-氨基-2-内酰脲和3-氨基-2-唑烷基酮混合标准工作溶液：1.0ug/mL。吸取适量四种硝基呋喃代谢物的标准贮备溶液，用甲醇配成1.0μg/mL的混合标准工作溶液，标准工作溶液避光贮存在-18℃冰柜中，保存期为3个月，使用前回温到室温。

5-甲基吗啉-3-氨基-2-唑烷基酮、氨基脲、1-氨基-2-内酰脲和3-氨基-2-唑烷基酮混合基质标准校准溶液：称取7个蜂蜜空白样品(称样量为4g)于50mL棕色离心管中，其中6个空白样品中分别加入适量四种硝基呋喃代谢物的混合标准工作溶液，按照样品操作步骤同步操作。使最终样液中5-甲基吗啉-3-氨基-2-唑烷基酮和3-氨基-2-唑烷基酮的浓度均分别为0ng/mL，0.5ng/mL，1.0ng/mL，2.0ng/mL，5.0ng/mL，10.0ng/mL，20.0ng/mL；氨基脲、1-氨基-2-内酰脲的浓度均分别为0ng/mL，1.0ng/mL，2.0ng/mL，5.0ng/mL，10.0ng/mL，20.0ng/mL，50.0ng/mL作为基质标准校准溶液，该基质标准校准溶液即配即用。

7.2.1.4 仪器和设备

液相色谱-串联四极杆质谱仪，配有电喷雾离子源。分析天平：感量0.1mg和0.01g各一台。液体混匀器。固相萃取装置。氮气吹干仪。恒温振荡水浴。真空泵：真空度应达到80kPa。微量注射器：25μL，100μL。棕色具塞离心管：25mL，50mL。pH计：测量精度±0.02pH单位。储液器：50mL。离心机：转速4000r/min以上。

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