非甾类同化激素类药残留分析前处理方法——提取

时间：2023-03-25 04:10:36来源：food栏目：食品快速检测阅读：

非甾类同化激素类药残留分析前处理方法——提取

[db:作者] / 2022-12-13 00:00

(2)提取方法

非甾类同化激素残留分析主要采用液液萃取(LLE)的方法提取。近年来，一些新的提取技术，如超声波辅助提取(UAE)、加速溶剂萃取(ASE)等也开始应用到非甾类同化激素残留的提取中。

1)液液萃取(liquid liquid extraction，LLE)

A.二苯乙烯类

二苯乙烯类化合物在弱极性和中等极性的有机溶剂中有较好的溶解性，常用的有机溶剂有甲醇、乙醚、叔丁基甲基醚、乙酸乙酯、三氯甲烷和乙腈等。

Yang等用甲醇提取猪肉、牛肉、虾、牛奶和肝脏的水解液，经固相萃取柱净化后，LC-MSMS检测。DIS、HES和DES的LOQ为0.04～2.0μg/kg，平均回收率为76.9%～121.3%，CV为2.4%～21.2%。应永飞等建立了动物组织中DIS、HES和DES残留量的检测方法。试样中的药物经甲醇超声提取后，过HLB固相萃取柱净化、氮吹至干，用流动相溶解后进行LC-MS/MS测定，以D8-DES为内标进行定量分析。方法LOD为0.2μg/kg，LOQ均为0.5μg/kg；加标浓度在0.5～10μg/kg范围内，动物组织中DIS、HES和DES的回收率为78.8%～110.9%，批内RSD小于或等于8.0%。许泓等利用叔丁基甲基醚提取动物源性食品中DES、HES和DIS残留，经硅胶固相萃取柱净化后，LC-MS/MS测定。方法对DES、DIS的LOD为0.05ng/g，在0.5～10ng/g范围内回收率为84%～108%；对HES的LOD为0.025ng/g，在0.25～5ng/g范围内回收率为59%～87%。Reuvers等先用叔丁基甲醚提取组织样品中的DES残留，再用1mol/L氢氧化钠提取，经C18固相萃取柱净化后，HPLC检测。该方法LOD为0.5～2.0μg/kg，回收率为66%。

张琴等用乙醚提取鸡肉样品中的DES，经IAC净化后，仪器检测。高效液相色谱(HPLC)检测方法的LOD为22.2ng/g，回收率为63.7%～67.6%；气相色谱-质谱(GC-MS)检测方法的LOD为0.33ng/g，回收率为54.1%～67.3%。vanPeteghem等用乙醚提取肉水解液中的DES残留，过固相萃取柱净化后，放射免疫(RIA)测定。LOD达0.07ng/g，回收率为64%～115%。

Li等用乙腈-丙酮溶液(4+1，v/v)提取鸡和虾组织中的DES，三氯甲烷脱脂，ELISA检测。该方法的LOD为600pg/mL，回收率大于79.5%，日内、日间CV低于6%。

尹怡等用乙酸乙酯超声提取水产品中的DES，过弗罗里硅土(Florisil)小柱进行净化，GC-MS测定。方法回收率大于80%，LOD为0.5μg/kg。吴银良等用10%碳酸钠溶液和乙酸乙酯提取动物组织中DES、DIS和HES，硅胶固相萃取柱净化，GC-MS分析。方法的LOD为0.30μg/kg (DES)、0.10μg/kg(HES)和0.15μg/kg(DIS)；在0.5～4.0μg/kg添加水平，回收率为73.0%～86.5%，RSD为1.0%～7.2%。

Coffin等利用DES溶解于碱性溶液的性质，用NaOH溶液和三氯甲烷反复萃取动物组织中的DES残留，衍生化后，气相色谱(GC)检测。其LOD可达2～10μg/L，回收率为70%～110%。Tirpenou等用苯和NaOH溶液提取样品中的DES，经硅胶柱净化后GC检测，方法回收率达到81%。

B.RALs

RALs属于二羟基苯甲酸内酯类化合物，其苯环上都有2个羟基，呈弱酸性，具有高度相似的化学结构和性质，文献报道的提取溶剂有乙醚、叔丁基甲基醚、乙腈和甲醇等。

彭涛等对乙醚、丙酮、正已烷和乙酸乙酯对RALs的提取效率进行了比较研究，结果显示乙醚的提取效率最高。动物肝脏中RALs在酸性环境中经β-葡萄糖苷酸/硫酸酯复合酶水解后，加入无水乙醚，振荡提取，经HLB固相萃取柱净化后，LC-MS/MS检测。在添加浓度1～4μg/kg范围内，方法回收率在70%～90%之间，RSD小于20%。6种RALs的CCa在0.17～0.31μg/kg之间，CCβ在0.26～0.42μg/kg之间。曹莹等用乙醚提取鸡肝酶解液，经液液分配净化后，用LC-MS分析ZER残留。方法的LOQ为4ng/g，回收率为65.0%～86.4%，CV为5.1%～15.4%。方晓明等用乙醚提取鸡肝β-葡糖苷酸酶酶解液，氢氧化钠抽提，C18小柱净化后，用HPLC检测。样品的加标平均回收率为72.0%～80.4%，RSD为8.3%～13.9%，LOQ为5μg/kg。Shin等用叔丁基甲基醚提取老鼠血清中的ZON，经液液分配净化后，HPLC分析。方法回收率为79.3%～96.2%，日内和日间CV低于12.1%，LOQ为10ng/mL。

Xia等采用乙腈提取牛奶中的ZER、TAL、ZAN、ZON、a-ZOL和β-ZOL，过MAX柱净化后，LC-MS/MS分析。方法平均回收率为92.6%～112.5%，CV低于11.4%，LOD和LOQ分别为0.01～0.05μg/L和0.05～0.2μg/L。张清杰等用乙腈提取牛奶和奶粉中的6种玉米赤霉醇及其类似物，经免疫亲和柱净化后，用HPLC检测。方法添加回收率均为80%～110%，CV均小于12%。钱卓真等利用乙腈提取水产品中的ZER、TAL、ZAN、ZON、a-ZOL和β-ZOL，乙腈饱和正己烷脱脂，氨基固相萃取柱净化后，LC-MSMS分析。方法LOQ为1.0μg/kg，回收率为75.9%～103.8%，RSD为3.90%～13.5%。Zhang等采用甲醇提取牛肌肉中的ZER、TAL、ZAN和a-ZOL，经免疫亲和柱(IAC)净化，衍生化后，用GC-MS检测。该方法LOD为0.5μg/kg，在1.0～5.0μg/kg添加范围内，回收率为79.6%～110.7%，CV为3.2%～11.4%。

C.二苯乙烯类和RALs同时提取

Kathrin等利用乙醚同时提取牛尿液中二苯乙烯类化合物(DES、DIS、HES)和RALs(ZER、TAL、a-ZOL、β-ZOL和ZON)。5mL尿液样品中加入2mL乙酸钠缓冲液(2mol/L，pH5.2)，加入100μL蜗牛液(Helix pomatia juice)，37℃避光放置16h或50℃放置3h，水解完成后，用氢氧化钠溶液(2molL)调pH9.0±0.1，5mL乙醚提取2次，旋转蒸干，加入1.5mL甲醇和3mL水，2mL正已烷洗涤2次，弃掉正己烷层，固相萃取柱净化，LC-MS/MS分析。方法检测二苯乙烯类化合物和RALs的LOD分别低于1μg/L和1.5μg/L，回收率分别为99.2%～106.0%和99.4%～107.9%。

2)加速溶剂萃取(accelerated solvent extraction，ASE)

ASE是指在提高的温度(50～200℃)和压力(1000～3000psi或10.3～20.6MPa)下用溶剂萃取固体或半固体样品的新颖样品前处理方法。与传统提取方式相比，ASE速度快、溶剂用量少、萃取效率高、待测组分回收率好，可实现全自动安全操作。在非甾类同化激素残留分析的前处理也有文献报道。

Gadzala-Kopciuch等建立了ASE提取组织中的ZON及其代谢产物a-ZOL。使用鸡肌肉和肝脏组织进行添加回收试验，对甲醇-水、乙腈-水，以及它们的不同比例混合进行比较。结果发现，乙腈-水(84+16，v/v)回收率最高(ZON和a-ZOL的回收率分别为95.4%和97.9%)，共萃取杂质少；正己烷脱脂会影响回收率；纯溶剂(甲醇、乙腈、三氯甲烷等)提取的回收率较差。ASE的最佳条件为：压力1500psi，温度200℃，静态萃取时间5min，静态循环5次，冲洗溶剂体积为池容积的75%(约11mL)。该方法检测ZON和a-ZOL的LOD分别为8.10ng/g和14.02ng/g，LOQ分别为24.30ng/g和42.06ng/g。

3)超声辅助萃取(ultrasound-assisted extraction，UAE)

UAE是利用超声波辐射压强产生的强烈机械振动、扰动效应、乳化、扩散、击碎和搅拌等多级效应，增大物质分子运动频率和速度，增加溶剂穿透力，从而加速目标成分进入溶剂，促进提取的进行。优点是萃取速度快，价格低廉、效率高。有文献报道采用UAE技术来提高非甾类同化激素的萃取效率。

Zhang等以甲醇为提取溶剂，常温超声30min，提取肉中的DES，再在碱性条件下(pH10.3)用氯仿分三次萃取，化学发光方法检测。方法的回收率为93.1%～104.5%，CV低于3.0%，LOD为0.75～1.12pg/mL。应永飞等以甲醇为提取溶剂，在60℃下超声5min，提取动物组织中的DIS、DES、HES等二苯乙烯类药物，LC-MS/MS测定。方法的LOD为0.2μg/kg，LOQ为0.5μg/kg；在0.5～10μg/kg添加浓度范围内，回收率为78.8%～10.9%，批内RSD小于等于8.0%。周建科等采用UAE方法提取中老年奶粉中的DES。奶粉样品中加入石油醚，超声萃取5min，离心，弃去石油醚，再加入乙腈，超声萃取5min，离心，取下层乙腈，氮气浓缩并定容至0.2mL，进HPLC测定。DES的LOD为0.025mg/L，RSD在1.55%～3.46%之间，平均回收率在85.0%以上。

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