镇静剂类药残留测定方法（四）

时间：2023-03-25 01:09:42来源：food栏目：食品快速检测阅读：

镇静剂类药残留测定方法（四）

[db:作者] / 2022-12-20 00:00

(5)液相色谱-质谱法(liquid chromatography-mass spectrometry， LC-MS)

LC-MS方法灵敏度和特异性高，近来愈加受到关注。而超高效液相色谱(ultra performance liquid chromatography，UPLC)是近年来发展起来的，以提高色谱柱性能和仪器解析度为核心高速检测系统，与质谱串联，大大提高了检测灵敏度。LC-MS检测主要采用大气压化学电离源(APCI)和电喷雾电离源(ESI)。

1)巴比妥类

巴比妥类药物呈酸性，高电场下容易失去质子带负电荷，LC-MS测定时检测负离子灵敏度远远大于正离子

SNT2217-2008采用反相C18色谱柱分离，乙腈-0.1%甲酸水为流动相，梯度洗脱，流速0.5mL/min，ESI负离子模式监测，串联质谱在多反应监测(MRM)模式下检测，外标法定量。各药物的LOQ为1μg/kg，回收率为78.6%～110%。Wang等建立了动物组织中7种巴比妥类药物残留的UPLC-MS/MS测定方法。采用C18色谱柱，流动相为甲醇-0.01%乙酸，梯度洗脱，采用ESI负离子、MRM模式检测。方法平均回收率在79.6%(巴比妥)-108%(司可巴比妥)之间，CV为3%～11%，LOD为0.25～0.5μg/kg，CCa为0.1～1μg/kg，CCβ为0.13～1.4μg/kg。

2)苯二氮卓类

钱晓东等建立了LC-MS/MS同时测定水产品中地西泮及其代谢物的残留检测方法。使用CAPCELL PAK C18(100mm×2.1mm i.d，3.5um)色谱柱分离，以甲醇和0.1%甲酸为流动相，梯度洗脱，流速0.2mL/min，串联质谱采用ESI正离子扫描，MRM模式监测，内标法定量。实验发现，采用甲醇-水体系时，目标化合物灵敏度高且噪声小；在ESI模式下，加入挥发性酸，降低流动相的pH，有助于待测物的离子化；同时，在低流速下可产生较细的雾滴，有利于产生气相离子，提高待测成分的信号强度。方法LOQ均为1μg/kg，平均回收率为82.1%～119.0%，RSD为2.2%～15.0%。Gunn等检测血液和血清中阿普唑仑、羟基地西泮、奥西泮、去甲地西泮、氯硝西泮、劳拉西泮、地西泮、甲氨二氮卓、咪达唑仑、氟硝西泮、7-氨基氯硝西泮和7-氨基氟硝西泮等12种苯二氮卓类药物残留，用水-乙腈(80+20，v/v)提取后直接进样，色谱柱为BEH C18 (50mm×2.1mm，1.7um)，流动相为甲醇-0.1%甲酸，梯度洗脱，流速0.4mL/min，串联质谱在ESI正离子模式下，采用MRM模式检测。方法LOQ为20 ng/mL，LOD为0.5～2ng/mL。Miyaguchi建立了毛发中13种镇静催眠药的LC-Orbitrap-MS分析方法。5mg样品用3.0mol/L磷酸铵溶液(pH8.4)进行微粉碎，用乙腈提取2次，蒸干有机层，再用50μL 10%乙腈(含0.1%甲酸)复溶，过滤，滤液进LC-Orbitrap-MS分析。采用多路选择离子监测(multiplexed selected ion monitoring)模式，Q ExactiveTM的四极杆质量过滤器成功地消除了大量干扰，使得检测分析物小峰成为可能。溴替唑仑、地西泮、去甲地西泮、艾司唑仑、氟硝西泮、硝西泮、三唑仑、雷美替胺和唑吡坦的LOQ为1.0 pg/mg，阿普唑仑、去甲氟地西泮、依替唑仑和佐匹克隆为4.0pg/mg；在100pg/mg和2.0ng/mg浓度水平下的准确度和精密度满足FDA法规要求。

3)吩噻嗪类

李春风等建立了水产品中氯丙嗪、乙酰丙嗪、丙酰丙嗪、异丙嗪和甲苯噻嗪等5种吩噻嗪类药物多残留的LC-MS/MS确证方法。以YMC- PackPro C18色谱柱为分离柱，乙腈-50 mmol/L pH 4.5乙酸铵溶液为流动相，梯度洗脱，流速300 uL/min，柱温30℃，在ESI正离子模式下进行测定。方法线性范围为0.5～5.0 ng/g，总体平均回收率为75.7%～ 87.7%，RSD 为9.0%～15.2%。Zhang等应用UPLC-MS/MS建立了同时测定动物组织中11种吩噻嗪类镇静剂的多残留检测方法。采用BEH C18色谱柱分离，ESI正离子串联质谱测定。猪肌肉、肾脏、肝脏中药物回收率在76.4%～118.6%之间，CV为2.2%～ 19.9%，LOQ 为0.5～2.0 μg/kg。Zheng 等报道了LC-MS/MS同时测定肝脏、肉类、肾脏和脂肪中甲苯噻嗪和2，6-二甲基苯胺残留量的方法。样品用乙腈提取并用正己烷净化，然后用C18反相色谱柱分离和API 5000正离子MRM模式的三重串联四极杆质谱进行分析。甲苯噻嗪和2，6-二甲基苯胺的LOQ分别为0.2μg/kg、5ug/kg，平均回收率分别为63.5%和90.8%。

4)丁酰苯类

Fluchard等应用LC-MS/MS测定猪组织中阿扎哌隆和阿扎哌醇。采用Purospher model RPIs反相色谱柱，甲醇-0.1 mmol/L乙酸铵缓冲液为流动相，梯度洗脱，APCI源电离，串联质谱测定。方法回收率为70%～106%，CV不超过16%。

5)多种类

Zhang等建立了兔血浆中奥氮平、氟哌啶醇、氯丙嗪、齐拉西酮和利培酮等药物的LC-MSMS检测方法。分析柱为Agilent Eclipse XDB C8 (150 mm×4.6mm，5um)，流动相为乙腈-30mmol/L醋酸铵(含0.05%三乙胺)，梯度洗脱，以丙咪嗪为内标，APCI正离子模式串联质谱测定。方法LOD为2.0 μg/L；线性范围为2.0～500.0 ug/L，相关系数为0.998；日内和日间CV均小于7.44%，回收率为70%～106%。Delahaut等建立了同时测定猪肾和肌肉中吩噻嗪类和丁酰苯类药物的残留分析方法。采用Purospher model RP18反相色谱柱分离，流动相采用乙腈-0.1 mol/L乙酸铵，APCI正离子离子源，MRM模式监测。肌肉中氯丙嗪、乙酰丙嗪、丙酰丙嗪的CCa为1.3μg/kg， CCβ为1.5～1.7μg/kg；肾脏中对应的LOD为肌肉中的2倍。

Zhang等同时测定了血液和尿液中巴比妥类、吩噻嗪类和苯二氮卓类药物。采用AcquityUPLC BEH C18色谱柱，乙酸铵缓冲液-甲醇-乙腈为流动相，梯度洗脱，UPLC-MS/MS 在ESI正离子和负离子两种模式下，MRM模式检测。方法平均回收率为60.2%～125%；4个巴比妥类药物的LOD为20～100 mg/L，吩噻嗪类和苯二氮卓类药物的LOD为0.05～2.0mg/L。渠岩等测定了畜禽肉中13种镇静药物(阿普唑仑、咪达唑仑、三唑仑、艾司唑仑、奥沙西泮、地西泮、硝西泮、氯硝西泮、卡马西平、利多卡因、苯巴比妥、异戊巴比妥和司可巴比妥)残留。采用Waters Aqutity BEH C18(2.1mm×50mm，1.7um)色谱柱，甲醇- 10 mmol/L乙酸铵溶液为流动相，梯度洗脱，流速0.4 mL/min，柱温35℃，进样量10μL， ESI 正离子离子源，MRM监测。13种镇静药物在空白猪肉中的平均添加回收率为77.4%～100.2%，LOD为0.05～3μg/kg。孙雷等1建立了猪肉和猪肾中安眠酮、氯丙嗪、异丙嗪、地西泮、硝西泮、奥沙西泮、替马西泮、咪达唑仑、三唑仑和唑吡旦等10种镇静剂类药物残留的UPLC-MS/MS分析方法。采用BEH C18色谱柱分离，0.1%甲酸乙腈溶液-0.1%甲酸溶液为流动相，梯度洗脱，ESI正离子模式电离，MRM模式检测，基质匹配标准溶液法进行定量。10 种镇静剂在2～100 μg/L范围内呈良好的线性关系，10种镇静剂的LOD为0.5μg/kg， LOQ为1μg/kg，回收率为64.5%～111.4%。GB/T 20763- 2006规定了猪组织中乙酰丙嗪、氯丙嗪、氟哌啶醇、丙酰二甲氨基丙吩噻嗪、甲苯噻嗪、阿扎哌隆、阿扎哌醇和咔唑心安残留量的LC-MS/MS检测方法。色谱柱为Inertsil ODS 3 (5um， 150mm×2.1mm)， 0.01 mol/L甲酸铵缓冲液(pH4)-乙腈-甲醇为流动相，梯度洗脱，柱温35℃，流速200 uL/min，进样量20μL， ESI 正离子模式下，MRM检测。各药物的LOD在0.1～0.5 μg/kg之间。

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