苯并咪唑类药物测定——气相色谱法

[db:作者] / 2022-12-22 00:00

(5)气相色谱法(gas chromatography，GC)

GC是一种以气体做流动相的柱色谱分离分析方法，具有分离效率高、灵敏度高、分析速度快及应用范围广等特点。随着科学技术的不断进步，研究者陆续开发了--些高选择性、高特异性的检测器；同时，快速GC和全二维GC等分离技术也相继出现，使得气相色谱技术得到了不断发展与完善。由于BMZs极性较高，挥发性较低，且热稳定性较差，BMZs一般都需要经衍生化后再测定。

Marti等中建立了GC方法测定动物组织中ABZ、FBZ、FLU、MBZ、OFZ、OXI、TBZ和TCB等8种BMZs残留。用乙腈提取肌肉组织中的药物，正己烷脱脂，分别用C18 SPE柱和硅藻土柱净化样品，洗脱液蒸干后，置于40℃装有五氧化二磷的真空器中干燥8h，残渣用2mL丙酮复溶，过膜，加入30μL 30%(m/v) 碳酸钠和50μL 10%(v/v)碘甲烷丙酮溶液，涡动混匀，密封，置于60℃石蜡浴器中衍生化30min，冷却后，混合物用氮气吹干，残渣加1mL乙酸乙酯和1mL水，涡动混匀，取出乙酸乙酯，再用1mL乙酸乙酯萃取2次，混合乙酸乙酯提取液，氮气吹干至0.1mL，再用硫酸钠脱水后，进GC分析。气相色谱条件：色谱柱为OV-1-CB石英玻璃毛细管柱(10m×0.25mm，膜厚0.25um)，载气为氦气，升温程序：60℃持续0.5min，以30℃/min从60℃升至150℃，再以6℃/min速度从150℃升至300℃，进样口温度270℃，检测器温度350℃，不分流，进样量1uL。甲基化衍生物分别用氮磷检测器(NPD)和电子捕获检测器(ECD)测定，研究发现，NPD较ECD测定的杂质干扰少；采用ECD只能检测到TBZ衍生物，而NPD可检测所有BMZs衍生物。该方法的LOD在20～50μg/kg之间。

(6)气相色谱-质谱法(gas chromatography -mass spectrometry，GC-MS)

GC-MS将GC的高分离效率、高灵敏度与MS的高选择性集为一体，通过分析质谱图和气相保留值，能对多组分混合物进行定性鉴定和分子结构的准确判断；并通过峰匹配法、总离子流质量色谱法、选择离子检测法，对待测物进行定量分析。GC-MS已经成为痕量物质分析的重要手段之一，广泛地应用于食品分析、石油化工、医药卫生等许多领域。GC-MS分析BMZs一般要经甲硅烷基化、甲基化、苄基化等衍生作用后再测定。

Wilson等采用GC-MS确证了肝脏和肌肉组织中的TBZ、TBZ-5-OH、ABZ-NH2-SO2、FBZ、CAM、MBZ和OFZ等BMZs残留。组织提取物采用两步法衍生化：首先用2mol/L HCl在110℃反应1h，将氨基甲酸酯水解为氨基；水解产物再与N-甲基-(叔丁基二甲基硅烷基)三氟乙酰铵(MTBSTFA)反应，使一级和二级胺硅烷化，而TBZ-5-OH的苯酚功能团转化成甲硅烷基。GC采用Hewlett-Packard(12m×0.20mm，0.33μm膜厚度)气相色谱柱，进样口温度260℃，起始柱温为150℃，保持2min，然后以6℃/min的速度升温至300℃，平衡0.5min，清除时间1.5min，质谱参数为接口温度300℃，驻留时间100ms，采用电子电离(EI)，SIM方式监测。在100μg/kg的添加水平下，肝脏组织平均回收率为92%，CV为8%，肌肉组织平均回收率为88%，CV为5%。该方法不适用于CAM，因为当注入三乙基氢氧化铵甲醇后，该药物会在进样口(260℃)快速烷化。Markus等建立了肝脏中ABZ的GC-MS测定方法。将0.4mL肝脏提取样品，于35℃±5℃蒸干，加入50uLMTBSTFA，涡动混匀，于100℃±4℃衍生化，每半小时取出涡动混匀一次，2h衍生完全后，用GC-MS分析。进样口温度260℃，升温程序：起始温度200℃，最终温度300℃，升温速度20℃/min，不分流，通风口流速100mL/min，载气为氦气，30～40psi，进样体积1.0～3.0μL，EI离子源温度140℃，分离器和传输线275℃±5℃，倍增器电压2000～2400eV，电子能量70eV，SIM模式监测。ABZ的LOD和LOQ分别为25μg/kg和50μg/kg。

Marti等建立了确证动物组织中8种BMZs残留的GC-MS方法。用乙腈提取肌肉组织中的药物，净化后，置于40℃装有五氧化二磷的真空器中干燥8h，残渣用2mL丙酮复溶，过膜，加入30uL 30%(m/v)碳酸钠和50μL 1%(v/v)五氟苄基溴(PFB-Br)溶液，涡动混匀，密封，置于60℃石蜡浴器中衍生化30min，冷却后，混合物用氮气吹干，残渣加1mL乙酸乙酯和1mL水，涡动混匀，取出乙酸乙酯，再用1mL乙酸乙酯萃取2次，混合乙酸乙酯提取液，氮气吹干至0.1mL，再用硫酸钠脱水后，进GC-MS分析。气相色谱柱为DB-1石英玻璃毛细管柱(30m×0.25mm，膜厚0.25um)，载气为氦气，升温程序：60℃持续0.5min，以30℃/min从60℃升至150℃，再以6℃/min速度从150℃升至300℃，进样口温度270℃，接口炉温为300℃，进样体积1uL，直接接口，离子化电压为70eV，源温度250℃，质量范围为50～750amu/s，EI和正离子化学电离源(PCI)电离。该研究评估了用氨基功能团衍生化的范围，发现用PFB-Br酰化和碘甲烷甲基化均能获得较满意的结果，而甲基化产物用EI和PCI电离测定时能提供对定量有用的结构信息，但在进样和分析过程中由于高温易降解，使得定量很困难。

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