液相色谱紫外检测法测定可食动物肌肉中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量

[db:作者] / 2022-12-20 00:00

12.2.3.1 适用范围

适用于牛肉、羊肉、猪肉、鸡肉和兔肉中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量的测定。方法检出限：土霉素、四环素、金霉素、强力霉素均为0.005mg/kg。

12.2.3.2 方法原理

用0.1mol/L Na2EDTA-Mcllvaine(pH=4.0±0.05)缓冲溶液提取可食动物肌肉中四环素族抗生素残留，提取液经离心后，上清液用OasisHLB或相当的固相萃取柱和羧酸型阳离子交换柱净化，液相色谱-紫外检测器测定，外标法定量。

12.2.3.3 试剂和材料

甲醇、乙腈、乙酸乙酯为色谱纯；磷酸氢二钠为优级纯；柠檬酸、乙二胺四乙酸_二钠、草酸为分析纯；0.2mol/L磷酸氢二钠溶液；0.1mol/L柠檬酸溶液；Mcllvaine缓冲溶液：将1000mL 0.1mol/L柠檬酸溶液与625mL 0.2mol/L磷酸氢二钠溶液混合，必要时用NaOH或HCl调pH=4.0±0.05；0.1mol/L Na2EDTA-Mcllvaine缓冲溶液：甲醇+水(1+19，v/v)溶液。

土霉素、四环素、金霉素、强力霉素标准物质，纯度≥95%。

标准贮备溶液：准确称取适量的标准物质，分别用甲醇配成0.1mg/mL的标准储备液，贮存在-18℃冰柜中。

混合标准工作溶液：根据需要稀释成适当浓度的混合标准工作溶液，混合标准工作溶液在4℃保存3天。

OasisHLB固相萃取柱或相当者，500mg，6mL，使用前分别用5mL甲醇和10mL水预处理，保持柱体湿润；

阳离子交换柱：羧基型，500mg，3mL，使用前用5mL乙酸乙酯预处理，保持柱体湿润；

12.2.3.4仪器和设备

液相色谱仪：配有紫外检测器；分析天平：感量0.1mg，0.01g；液体混匀器；固相萃取装置；贮液器：50mL；高速冷冻离心机：最大转速13000r/min；刻度样品管：5mL，精度为0.1mL；真空泵：真空度应达到80kPa；振荡器；平底烧瓶：100mL；pH计：测量精度±0.02。

12.2.3.5 样品前处理

(1)试样制备

从全部样品中取出有代表性样品约1kg，充分搅碎，混匀，均分成两份，分别装入洁净容器内。密封作为试样，标明标记。在抽样和制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。将试样于-18℃冷冻保存。

(2)提取

称取6g绞碎、混匀的肉样，精确到0.01g，置于50mL具塞离心管中，加入30mL 0.1mol/L Na2EDTA-Mllvaine缓冲溶液(pH=4)，于液体混匀器上快速混合1min，再用振荡器振荡10min，以4000r/min离心10min，上清液倒入另一离心管中，残渣中再加入20mL缓冲溶液，重复提取一次，合并上清液，待净化。

(3)净化

将上清液倒入下接OasisHLB柱或相当者的贮液器中，上清液以≤3mL/min的流速通过Oasis或相当的固相萃取柱，待上清液完全流出后，用5mL甲醇+水洗柱，弃去全部流出液。在65kPa的负压下，减压抽干20min，最后用15mL乙酸乙酯洗脱，收集洗脱液于100mL圆底烧瓶中。

按上述方法使洗脱液在减压情况下以≤3mL/min的流速通过羟基阳离子交换柱，待洗脱液全部流出后，用5mL甲醇洗柱，弃去全部流出液。在65kPa负压下，减压抽干5min，再用4mL流动相洗脱，收集洗脱液于5mL样品管中，定容至4mL，供液相色谱紫外检测器测定。

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