硫脲嘧啶类药物测定方法（二）

时间：2023-03-24 21:57:39来源：food栏目：食品快速检测阅读：

硫脲嘧啶类药物测定方法（二）

[db:作者] / 2022-12-22 00:00

(4)薄层色谱法(thin layer chromatography，TLC)

Briggemann等在化学比色法的基础上将TLC结合进来检测硫脲嘧啶类药物。硫脲嘧啶类药物与2，6-二氯醌氯亚胺(2，6-dichloroquinone-chloroimide)特异性显色反应，通过TLC初步分离，显色测定。在随后的研究中，该方法又得到了改进。De Brabander等用甲醇均质提取组织样品后，用NBD-CI与硫脲嘧啶类药物衍生反应，反应产物再采用二维高效薄层色谱(2D-HPTLC)分离，碱性半胱氨酸试剂对斑点显色，出现荧光斑点。该方法灵敏度可以降低到10ppb。1984年，De Brabander等又在该方法中增加了汞基柱的净化步骤，成为欧盟硫脲嘧啶类药物残留检测官方方法的制定依据。

(5)气相色谱法(gas chromatography，GC)

硫脲嘧啶类药物极性较强，用GC测定是往往需要先进行衍生化，再采用氮磷检测器(NPD)、火焰光度检测器(FPD)或电子捕获检测器(ECD)检测。

Pensabene等建立了组织中4种硫脲嘧啶类药物的GC-NPD测定方法。组织样品用乙腈-水(10+1，v/v)提取，石油醚LLP除去脂肪，再用硅胶SPE柱净化后，提取物加入MSTFA于55℃衍生反应30min，用丙酮定容后GC-NPD测定。采用DB-5MS毛细管柱(30m×0.25mm i.d，0.25μm)程序升温分离。方法检出限(S/N=2：1)为0.05μg/g；硫脲嘧啶回收率为93.5%±2.9%，甲巯咪唑为90.3%±3.0%，甲基硫脲嘧啶为87.5%±2.9%，丙基硫脲嘧啶为85.1%±5.8%。Laitem等开发了动物组织中甲基硫脲嘧啶的GC-FPD检测方法。乙酸乙酯提取物在50℃用氮气吹干，用0.5mL苯-甲醇(85+15，v/v)复溶，过Sephadex柱净化，苯-甲醇(85+15，v/v)洗脱，弃去前3mL，收集4-7mL。氮气吹干后，加入1mL 0.1mol/L醋酸钾的乙醇溶液和50μL碘甲烷，55℃衍生化反应70min，再吹干，固体残留物用1mL双蒸水复溶，再用3×1mL苯萃取，浓缩至1mL后，进GC检测。NPD检测器配置394nm滤光片，玻璃管柱(1.8m×4ini.d.)用含3%0V-1的担体WHP(SO-100目)填充，以氮气为载气，流速35mL/min，氢气流速40mL/min，空气流速170mL/min，进样口温度200℃，炉温180℃，检测器温度175℃。该方法检测灵敏度为10ppb，回收率在50%左右。

DeBrabander等介绍了一种采用GC-ECD检测硫脲嘧啶类药物的残留分析方法。样品溶液(奶、血液、尿或含水提取物)用醋酸苯汞环己烷溶液-一步提取和净化，药物与汞形成复合物进入环已烷层，蒸干后，用PFB-Cl衍生化反应，形成五氟氯化苄衍生物，GC-ECD检测。方法检测限为0.2ppb。

(6)高效液相色谱法(high performance liquid chromatography，HPLC)

硫脲嘧啶类药物主要采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)，配备紫外检测器(UVD/DAD)和化学发光检测器(CLD)测定。

Buick等建立了甲状腺和血清中的甲巯咪唑、硫脲嘧啶、甲基硫脲嘧啶、丙基硫脲嘧啶和苯基硫脲嘧啶的HPLC-DAD检测方法。采用RP-18色谱柱(250mm×4mm，10μm)分离，乙腈和0.025mol/L磷酸盐缓冲液(pH3)为流动相，梯度洗脱，甲巯咪唑在258nm处检测，其他药物在276nm检测。甲状腺中5种药物的回收率在18.0%～75.4%之间，日间CV不超过25.88%，检测灵敏度为2.45～4.52ng/g；血清中5种药物的回收率在40.0%～92.6%之间，日间CV不超过26.67%，检测灵敏度为16.98～35.25ng/mL。Hollosi等建立了鱼肉中甲巯咪唑、甲硫脲、甲脲乙醇酸酐和巯基咪唑的HPLC-UVD检测方法。用Atlantis dC18色谱柱(150mm×4.0mm，5μm)分离，甲醇和pH6.7磷酸盐缓冲液为流动相，梯度洗脱，流速1mL/min，甲巯咪唑和巯基咪唑在255nm检测，甲硫脲和甲脲乙醇酸酐在220nm检测。该方法回收率在85.2%～97.6%之间；甲巯咪唑、甲硫脲、甲脲乙醇酸酐和巯基咪唑的LOD(S/N=3：1)分别为0.06μg/mL、0.10μg/mL、0.43μg/mL和0.06μg/mL。Asea等也用HPLC-UVD测定了动物甲状腺和肌肉中的甲巯咪唑和巯基苯并咪唑。采用C18色谱柱分离，甲巯咪唑和巯基苯并咪唑分别在255nm和300nm处检测。Chernovyants等用HPLC-UVD检测了尿液中的丙基硫脲嘧啶、甲基咪唑硫酮和甲基咪唑硫酮乙酯。采用Diasfer-110-C18反相色谱柱(5um，150mm×4.0mm)分离，流动相为乙腈-pH6.86磷酸盐缓冲液(25+75，v/v)，流速1mL/min，检测波长为：甲基咪唑硫酮254nm，丙基硫脲嘧啶275nm，甲基咪唑硫酮乙酯292nm。甲基咪唑硫酮、丙基硫脲嘧啶和甲基咪唑硫酮乙酯的检测限分别为0.29mg/L、0.26mg/L和0.24mg/L。

Wei等开发一种利用HPLC-柱后-CLD测定血清中丙基硫脲嘧啶和甲基硫脲嘧啶的分析方法(图19-15)。分析柱为Nucleosil C18(250mm×4.6mmid，5um)，流动相为甲醇-水(40+60，v/v)，等度洗脱，流速1mL/min。柱后流出物先与甲醛反应，再与KMnO4溶液在混合线圈中反应，柱后反应溶液流速为2mL/min。反应所发射的光由光电倍增管(-800V)监测。该方法LOD为0.03μg/mL，LOQ为0.1ug/mL；回收率在90%～110%之间，RSD小于5%。

图19-15 HPLC-CLD检测示意图

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