大环内酯类和林可胺类药物残留测定方法——高效液相色谱法

时间：2023-03-25 05:44:20来源：food栏目：食品快速检测阅读：

大环内酯类和林可胺类药物残留测定方法——高效液相色谱法

[db:作者] / 2022-12-12 00:00

(5)高效液相色谱法(highperformanceliquidchromatography，HPLC)

HPLC可分析沸点在500℃以上、大分子、强极性和热稳定性差的化合物，在兽药残留分析中得以广泛应用。MALs和林可胺类药物常用的检测器有紫外检测器(ultravioletdetector，UVD)和二极管阵列检测器(diode-arraydetector，DAD；photo-diodearraydetector，PDA)，也有采用电化学检测：器(electrochemicaldetector，ECD)和荧光检测器(fluorescencedetector，FLD)的报道。

1)UVD、DAD/PDA检测

Prats等建立了不同动物组织中的泰乐菌素残留量的HPLC法。该方法应用氯仿或乙酸乙酯在碱性的条件下提取肌肉、肝脏、肾脏和脂肪组织中的泰乐菌素，使用C18反相色谱柱进行分离，乙腈-水(含0.04mol/L的磷酸氢二钠，pH2.4)为流动相，最后用UVD进行检测。在50～500μg/kg的添加浓度范围内线性良好，LOQ可达到50ppb。孔科等将肉鸡中的肌肉、肝脏、肾脏和脂肪组织制备匀浆后，用乙腈、石油醚和二氯甲烷液液分配净化泰乐菌素，浓缩后用乙腈定容，以乙腈-甲醇-0.005mol/L磷酸二氢铵溶液(60+30+10，v/v)为流动相，HPLC分离，UVD进行检测。样品前处理最终溶液中的泰乐菌素LOD为0.05mg/L，在肌肉、脂肪、肝脏和肾脏组织中的LOD均为0.10mg/L，标准曲线的线性范围为0.10～6.40mg/L。张永创建立了猪肉中替米考星残留量的检测方法。以乙腈、水、四氢呋喃为流动相，HPLC-DAD在波长290nm检测，进样量为100μL。方法LOD为0.01ug/g，LOQ为0.02ug/g。刘晔等测定猪肝中的MALs，样品经甲醇提取后，用scx固相萃取柱进行净化，再以0.025mol/L磷酸缓冲液-乙腈(pH2.5)为流动相，在C18分离柱上梯度洗脱，HPLC-DAD检测，方法LOD为0.01～0.037μg/mL，在0.2～20μg/mL范围内峰面积与质量浓度成良好线性关系，相关系数大于0.998。王斌、李存、王雪敏等44461分别建立了动物(牛、猪、鸡)肺脏、猪组织、羊组织中替米考星残留量的HPLC检测方法。样品用乙腈提取，Ci8固相萃取柱净化，UVD在290nm波长测定。方法LOD为0.01mg/kg，LOQ为0.04mg/kg；在0.04mg/kg、0.1mg/kg、1.0mg/kg、10.0mg/kg；添加水平，方法平均回收率在76.8%～94.1%之间，CV在2.7%～8.6%之间。杨方等利用HPLC法同时检测水产品中螺旋霉素和泰乐菌素药物残留。以乙腈和pH2.5磷酸缓冲溶液的混合液作流动相，在MeckPurospherSTAR RP18(250mm×4.6mm，5μm)色谱柱上梯度洗脱、分离，在232nm、287nm分别对螺旋霉素及泰乐菌素进行紫外检测。方法平均回收率为82.2%～89.0%，RSD为6.24%～9.83%。刘永涛、苏秀华等148.49)建立了检测水产品肌肉组织中螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素、北里霉素的UPLC检测方法。以乙腈-25mmol/L磷酸二氢铵(pH2.5，含10%乙腈)为流动相，ACQUITYUPLCBEH C18色谱柱分离，UVD(232nm-螺旋霉素，287nm-泰乐菌素)测定。方法平均回收率为70%～102%，RSD为2.9%～11.2%，螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素和北里霉素的LOD分别为25μg/kg、25ug/kg、50ug/kg、75ug/kg。

吴宁鹏等建立了牛奶中替米考星残留量的检测方法。样品经乙腈提取，C18柱净化处理，290nm波长下进行HPLC测定。在添加浓度0.025μg/mL、0.05ug/mL、0.10μg/mL水平，方法的平均回收率在72.1%～85.8%之间，日内CV在7.0%～10.7%之间，日间CV在3.5%～5.4%之间，LOD为0.005μg/mL。Garcia-Mayor等建立了羊奶中MALs残留的HPLC-DAD检测方法。样品经氢氧化钠和乙酸乙酯去除蛋白后，用碱水解除脂，HPLC-DAD测定。方法的回收率为55%～77%，RSD为1%～6.5%。王海涛等建立了牛奶中替米考星、泰乐菌素和螺旋霉素残留量的HPLC同时检测方法。以甲醇为提取液，SCX固相萃取柱净化，0.05moL/L磷酸二氢钠溶液-乙腈为流动相，在ORBAXEclipseXDB C18 (5um，150mm×4.6mm id)反相色谱柱.上进行分离，梯度洗脱，流速1mL/min，用DAD检测。替米考星、泰乐菌索和螺旋霉素的LOD分别为30μg/kg、20μg/kg、40μg/kg，线性范围为20～800ug/kg，平均回收率为88.8%～99.4%，RSD为2.2%～8.9%。

赵明建立了蜂蜜中林可霉素残留的HPLC检测方法。样品经提取、净化、反相HPLC分离后，用DAD进行检测。流动相为硼砂缓冲液(pH5.0)-甲醇-乙腈(70+26+4，v/v)，流速为1.0mL/min，进样量为20uL，检测波长为204nm。在1.0～20μg/mL范围内，线性关系良好，方法LOD为75ng/g，平均回收率为93.02%，日内CV小于1.58%，日间CV小于1.49%。

2)ECD检测

Hanada等建立了鼠肝脏中红霉素检测的HPLC-ECD检测方法。氧化红霉素的检测池电势为+1100mV，线性范围为0.5～100.0μg/g，而后应用于临床静脉给药后的浓度测定，完全符合红霉素在小动物药动学研究中的特点，因此该方法是可靠的。Luo等建立了反相HPLC用于鱼组织中林可霉素残留的检测方法。组织样品用磷酸二氢钾缓冲液(pH4.5)进行提取，C18柱净化，50%乙腈进行洗脱，再使用乙酸乙酯进行提取，最后用离子对HPLC-ECD检测。鱼肉的LOD可以达到7ng/g，LOQ可以达到17ng/g；鱼皮的LOD可以达到12ng/g，LOQ可以达到24ng/g。

3)FLD检测

于慧娟等采用HPLC-FLD技术建立了对虾中红霉素残留量的测定方法。以乙腈为提取溶剂，40mg/mL的NaCl水溶液溶解残渣，正己烷去脂、二氯甲烷反萃取，再向乙腈溶液中加入100uL 0.1moL的KH2PO4(pH7.5)和100uL 2.5mg/mL的衍生试剂(FMOC-CL)，于40℃衍生化反应1h，HPLC-FLD测定，激发波长255nm，发射波长315nm。方法LOD为150ug/kg，回收率在75%以上。汪金菊建立了鸡体内阿奇霉素及消除规律研究的HPLC-FLD方法。试验样品(血浆、肌肉、肝脏)经过氢氧化钠碱化后，用正已烷提取净化，吸取适量有机层45℃氮气吹干，再加入衍生试剂9-芴基氯甲酸酯和硼酸盐缓冲液置于50℃水浴锅中衍生40min，最后加入甘氨酸作为终止液，上机检测。试验采用AgilentC18柱(4.6mm×250mm)作为分离色谱柱，选择0.05mol/L磷酸盐缓冲液(含0.2%三乙胺)-乙腈(29+71，v/v，pH5.8)混合液为流动相，激发波长为265nm，发射波长为315nm，流速1.2mL/min，柱温35℃，进样量为20uL。测得血浆中阿奇霉素LOD为0.02μg/mL，肌肉和肝脏为0.03ug/g，LOQ三者均为0.04μg/mL，标准曲线的线性范围为0.04～5μg/mL。

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