液相色谱-串联质谱法测定河豚鱼、鳗鱼及烤鳗中9种糖皮质激素残留量
液相色谱-串联质谱法测定河豚鱼、鳗鱼及烤鳗中9种糖皮质激素残留量
[db:作者] / 2022-12-19 00:0010.2.1.1 适用范围
适用于河豚鱼、鳗鱼及烤鳗中9种糖皮质激素(泼尼松龙、泼尼松、氢化可的松、可的松、甲基泼尼松龙、倍他米松、地塞米松、倍氯米松、醋酸氟氢可的松)残留量的液相色谱-串联质谱测定。方法检出限:泼尼松龙、泼尼松、氢化可的松、可的松、甲基泼尼松龙、倍他米松、地塞米松为0.2μg/kg;倍氯米松、醋酸氟氢可的松为1.0μg/kg。
10.2.1.2 方法原理
河豚鱼、鳗鱼及烤鳗中泼尼松龙、泼尼松、氢化可的松、可的松、甲基泼尼松龙、倍他米松、地塞米松、倍氯米松、醋酸氟氢可的松9种糖皮质激素残留,加入无水硫酸钠,用乙酸乙酯提取,提取液浓缩后,经过硅胶固相萃取柱净化,液相色谱-串联质谱仪测定,外标法定量。方法检出限:泼尼松龙、泼尼松、氢化可的松、可的松、甲基泼尼松龙、倍他米松、地塞米松为0.2μg/kg;倍氯米松、醋酸氟氢可的松为1.0μg/kg。
10.2.1.3 试剂和材料
甲醇、乙腈、乙酸乙酯、正已烷、丙酮:色谱纯;甲酸:优级纯。
丙酮-正己烷溶液:丙酮+正己烷(2+3,v/v)。量取200mL丙酮与300mL正已烷混匀。无水硫酸钠:分析纯。在650℃马弗炉中灼烧6h,储存于干燥器中。
泼尼松龙、泼尼松、氢化可的松、可的松、甲基泼尼松龙、倍他米松、地塞米松、倍氯米松、醋酸氟氢可的松(CAS:514-36-3)标准物质:纯度≥98%。
1.0mg/mL标准储备溶液:分别准确称取适量的糖皮质激素标准物质,用甲醇溶解,分别配制成1.0mg/mL储备溶液。配成的标准储备液应在温度低于-20℃冰箱中保存。
5.0μg/mL标准工作溶液:分别准确吸取适量的糖皮质激素标准储备溶液,用甲醇分别配制成5.0μg/mL标准工作溶液。配成的标准工作溶液应在温度低于4℃冰箱中保存。
混合标准工作溶液I:分别吸取适量的氢化可的松和可的松标准工作溶液,用甲醇配成浓度为0.05μg/mL的混合标准工作溶液。此溶液应在温度低于4℃冰箱中保存。测定样品使用时,用20%乙腈溶液将混合标准工作溶液I配成不同浓度的混合标准工作溶液。
混合标准工作溶液II:分别吸取适量的泼尼松龙、泼尼松、甲基泼尼松龙、倍他米松、地塞米松倍氯米松、醋酸氟氢可的松标准工作溶液,用甲醇配成泼尼松龙、泼尼松、甲基泼尼松龙、倍他米松、地塞米松为0.05μg/mL,倍氯米松、醋酸氟氢可的松为0.25μg/mL的混合标准工作溶液。此溶液应在温度低于4℃冰箱中保存。
基质混合标准工作溶液:测定样品使用时,用空白样品提取液将混合标准工作溶液II配成不同浓度的基质混合标准工作溶液。此溶液应现用现配。
CleanertSilica固相萃取柱或相当者:500mg,6mL。使用前用6mL正己烷预处理,保持柱体湿润。
10.2.1.4 仪器和设备
液相色谱-串联质谱仪:配有电喷雾离子源(ESI);分析天平:感量0.1mg和0.01g;固相萃取真空装置;真空泵:真空度应达到80kPa;均质器;振荡器;高速冷冻离心机:转速13000r/min;旋转蒸发器;氮气浓缩仪;具塞塑料离心管:50mL;样品管:10mL;梨形瓶:150mL。
10.2.1.5 样品前处理
(1) 试样制备
从全部样品中取出有代表性样品约1kg,充分搅碎,混匀,均分成两份,分别装入洁净容器内。密封作为试样,注明标记。在抽样和制样的操作过程中,应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。将试样于-18℃冷冻保存。
(2)提取
称取5g试样(精确到0.01g),置于50mL具塞塑料离心管中,加入10g无水硫酸钠,加25mL乙酸乙酯,用均质器均质1min,在振荡器振荡20min,以10000r/min离心10min,取上清液至梨形瓶中。再用25mL乙酸乙酯提取一次,合并上清液,用旋转蒸发器于45℃水浴上减压蒸发至近干,用1mL乙酸乙酯和5mL正己烷溶解。
(3)净化
将提取液移至经预处理的Cleanert Silica固相萃取柱中,用6mL正己烷洗涤梨形瓶和萃取柱,弃去全部流出液。减压抽干1min,用6mL丙酮+正己烷(2+3,v/v)洗脱,收集洗脱液于10mL样品管中,用氮气浓缩仪吹干,用1mL 20%乙腈溶液溶解残渣,以4000r/min离心5min,上清液过0.2μm滤膜,供液相色谱-串联质谱仪测定。
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