液相色谱串联质谱法测定牛奶和奶粉中甲硝唑、洛硝哒唑、二甲硝唑及其代谢物残留量

[db:作者] / 2022-12-21 00:00

16.2.1.1 适用范围

适用于牛奶和奶粉中甲硝唑、洛硝哒唑、二甲硝唑及其代谢物残留量的高效液相色谱-串联质谱测定。方法检出限：牛奶中甲硝唑、洛硝哒唑、二甲硝唑为0.5μg/kg，羟基甲硝唑为1ug/kg，1-甲基-2-羟甲基-5-硝基咪唑为2.5μg/kg；奶粉中甲硝唑、洛硝哒唑、二甲硝唑2.5μg/kg，羟基甲硝唑为5μg/kg，1-甲基-2-羟甲基-5-硝基咪唑为12.5μg/kg。

16.2.1.2 方法原理

用乙腈-乙酸乙酯提取牛奶和奶粉中甲硝唑、洛硝哒唑、二甲硝唑及其代谢物残留，阳离子固相萃取柱净化，高效液相色谱-串联质谱测定，内标法定量。

16.2.1.3 试剂和材料

乙腈、乙酸乙酯、甲醇、丙酮、乙酸、氨水：色谱纯；无水硫酸钠，分析纯：经650℃灼烧4h，置于干燥器内备用；氨水-乙腈(1+19，v/v)：量取5mL氨水，用乙腈定容至100mL。

标准品：甲硝唑、洛硝哒唑、二甲硝唑、羟基甲硝唑、1-甲基-2-羟甲基-5-硝基咪唑、氘代洛硝哒唑(RNZ-D3)、氘代羟基甲硝哒唑(MZNOH-D2)和氘代1-甲基-2-羟甲基-5-硝基咪唑(HMMNI-D3)：纯度均大于等于98%。

标准储备液：分别精确称取适量标准品，用甲醇配制成100μg/mL的标准储备液。

混合标准中间工作液：取标准储备液各1mL至100mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配制成混合标准工作液，浓度为1μg/mL。

内标标准储备溶液：称取适量氘代内标标准品，用甲醇溶解成浓度为200μg/mL储备液。

内标混合标准中间工作液：量取适量标准储备液，用甲醇定配制成内标混合标准中间工作液，浓度为1μg/mL。

阳离子固相萃取柱：500mg，3mL，使用前依次用3mL甲醇、3mL乙酸乙酯活化。

16.2.1.4 仪器和设备

高效液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源(ESI)；离心机；分析天平：感量0.1mg和0.01g；旋涡混合器；旋转蒸发仪；氮吹仪；固相萃取装置。

16.2.1.5 样品前处理

(1)试样制备

a.牛奶：取均匀样品约250g装入洁净容器作为试样，密封置4℃下保存，并标明标记。

b.奶粉：取均匀样品约250g装入洁净容器作为试样，密封，并标明标记。

(2)提取

牛奶样品称取5g(准确至0.01g)于50mL具塞离心管中，奶粉样品称取1g(准确至0.01g)。并加入5mL水，往称取好的样品中加入25μL100ng/mL内标混合液，混匀。

在称取好样品离心管中首先加入5mL乙腈以沉淀蛋白，然后再加入20mL乙酸乙酯，振荡提取2min后，3000r/min离心10min，移取上清液并通过5g无水硫酸钠过滤至鸡心瓶中。再用20mLZ酸乙酯重复提取一-次，合并上清液于同一鸡心瓶中。

(3)净化

将提取液于45℃下旋转蒸发至约2mL左右，然后转移到已活化的固相萃取柱上，再用5mL乙酸乙酯洗涤鸡心瓶两次，洗液一并转移到固相萃取柱上，以小于2mL/min流速滴下。接着依次用3mL丙酮，3mL甲醇，2mL氨水-乙腈(5+95，v/v)淋洗，最后用5mL氨水-乙腈(5+95)洗脱并收集(此过程流速小于2mL/min)。洗脱液在45℃水浴上用氮气小心吹至近干，用水定容至1mL，涡漩混合后，过0.45um滤膜供HPLC-MSMS分析。

(4)空白基质溶液的制备

将取牛奶阴性样品5g，奶粉阴性样品1g(精确到0.01g)，按上述提取净化步骤操作。

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