咪唑骈噻唑类药物测定方法（二）

时间：2023-03-24 22:16:36来源：food栏目：食品快速检测阅读：

咪唑骈噻唑类药物测定方法（二）

[db:作者] / 2022-12-22 00:00

(5)超临界流体色谱法(supercritical fluid chromatography，SFC)

SFC是一种介于GC和HPLC之间的色谱技术。揉合了GC的高速度、高效率和HPLC的选择性强、分离效能高等优点，是一种有力的分离和检测手段。Perkins等建立了同时检测猪组织中左旋咪唑等药物的SFC和SFC-MS方法。采用氨基键合固定相，以二氧化碳与甲醇改性剂作为流动相，对药物分离条件进行了摸索，结果显示尽管使用较高比例的改性剂，左旋咪唑仍然吸附在氰基键合、ODS2和硅基等酸性固定相上；同时研究了改性剂特性变化的影响，发现较低比例的改性剂能使左旋咪唑.与内在的化合物及溶剂峰分离，同时也对采用传送带(MB)接口技术和改进后的热喷雾(TSP)接口技术的填充柱SFC-MS法进行了研究，发现蒸发器温度在80℃时左旋咪唑能够产生大的响应值。

(6)气相色谱-质谱法(gas chromatography-mass spectrometry，GC-MS)

GC-MS是残留分析中常用的确证技术。目前也有用于左旋咪唑残留分析的报道。徐静等建立了测定动物组织中左旋咪唑残留的GC-MS方法。以乙酸乙酯进行提取，分别以HCl溶液、KOH-二氯甲烷体系进行两次LLP净化，依次消除提取液中的脂溶性杂质和水溶性杂质，最后进入GC-MS，采用电子轰击源(EI)电离检测。在选择离子监测(SIM)模式下，以m/z148、176、204为定性离子，m/z204为定量离子进行结构确证和定量检测。结果表明，左旋咪唑含量在0.25～3.0mg/L范围内，方法的线性关系良好，相关系数为0.999；方法LOQ为5μg/kg；鸡肝、鸭肝、兔肝和猪肝样品中的加标回收率在76%～106%范围内，RSD小于9%。Trehy等报道了采用GC-MS测定尿液中左旋咪唑残留的方法，并用于因使用可卡因导致中性粒细胞减少或粒细胞缺乏症的评价中。该方法在两个不同的实验室进行了验证测试，当取样量为5mL时，方法LOD为1ng/mL。Bertol等也采用GC-MS方法测定尿液中的左旋咪唑，并对左旋咪唑在马、犬和人中的代谢进行了研究。样品经LLE后，进GC-MS分析，3个碎片离子定性，LOQ为0.15ng/mL。

(7)液相色谱-质谱法(liquid chromatography-mass spectrometry，LC-MS)

与LC的常规检测器如UVD、PDA等相比较，质谱检测器(MSD)选择性好、灵敏度高、定性能力强，因而可以简化实验步骤，减少样品预处理过程。

1)单极四极杆质谱(LC-MS)

Cannavan等建立了绵羊组织中左旋咪唑残留的LC-热喷雾(TSP)-MS检测方法。色谱柱为Li-Chrospher 60 RP-select B(125mm×4mmid，5um)，流动相为含0.1mol/L醋酸铵的乙腈-四氢呋喃-三乙胺-水(350+50+2+598，v/v)，等度洗脱，流速1.0mL/min，TSP电离，选择离子监测(SIM)模式下检测，以[M+H]+离子(m/z205)定量。方法的LOD为5ng/g，在肝脏、肾脏和肌肉组织的平均回收率分别为93%、85%和 9%。

Jedziniak等建立了牛奶中左旋咪唑等20种咪唑类药物的筛查方法。采用乙酸乙酯提取，正已烷和酸化乙醇LLP净化，LC-MS测定。采用XTerra MS C18(150mm×2.1mm，3.5um)色谱柱分离，柱温30℃，流动相为乙腈和0.025mol/L的乙酸铵溶液(乙酸调pH5.0)，梯度洗脱，流速0.2mL/min，在电喷雾正离子(ESIT)、SIM模式下检测，以[M+H]+离子(m/z205)定量。在添加浓度5ug/kg、10μg/kg、15μg/kg范围内，回收率在84%～89%之间，CV小于9.8%；LOD在0.1～1.0μg/kg之间，L0Q在0.5～2.0ug/kg之间。

2)串联四极杆质谱(LC-MS/MS)

Baere等采用LC-MS/MS测定动物血浆中的左旋咪唑。以LiChrospher 60 RP-select B(125mm×34mmid.5μm)作为分离柱，含有7.7%(体积比)四氢呋喃和0.3%(体积比)三乙胺的0.1mol/L乙酸铵溶液-乙腈(60+40，v/v)作为流动相，流速0.2mL/min，MS/MS在ESI、多反应监测(MRM)模式下检测，以甲基左旋咪唑作为内标定量。在0～0.5μg/mL范围内线性关系良好，r大于0.99；LOQ为0.025μg/mL，LOD为0.009μg/mL；日内、日间CV在欧盟要求的范围之内。Tong等建立了人血浆中左旋咪唑的LC-MS/MS检测方法。采用HC-C18(150mm×4.6mm，5um)分离柱，40℃分离，流动相为乙腈-10mmol/L乙酸铵(70+30，v/v)，流速为0.5mL/min，ESI+、MRM模式检测，以甲苯咪唑为内标定量。在0.1～30ng/mL范围内线性良好，LOQ为0.1ng/mL，CV小于8.5%。

De Ruyck等建立了牛奶中左旋咪唑等驱虫药多残留的LC-ESI-MS/MS检测方法。采用Alltima C18(15mm×2.1mm，5um)作为分离柱，0.1%甲酸溶液-乙腈为流动相，梯度洗脱，流速为0.25mL/min，在ESIt、MRM模式下检测，以甲苯咪唑为内标定量。左旋咪唑回收率在89.6%～102.9%之间，RSD在6.1%～8.3%之间，LOD为0.5μg/kg。薄海波等建立了UPLC-MSMS测定牛奶和奶粉中左旋咪唑残留量的方法。采用BEH C18超高效液相色谱柱，以乙腈-0.1%甲酸(15+85，v/v)为流动相，流速为0.25mL/min，在ESI+、MRM模式下进行质谱分析。结果表明，在2.0～100.0μg/L浓度范围内，呈良好的线性关系，相关系数r为0.997；在低、中、高3个添加水平下，回收率为64.5%～102.0%，RSD小于13.1%；牛奶中的LOD为0.4μg/kg，奶粉为2.0μg/kg。Whelan等报道了牛奶中驱虫药残留的UPLC-快速极性切换-MS/MS检测方法。分析柱为HSST3(100mm×2.1mm，1.8um)，流动相为0.01%冰醋酸-乙腈(90+10，v/v)和含5mmol/L甲酸铵的甲醇溶液-乙腈(75+25，v/v)，梯度洗脱，流速为0.6mL/min，质谱用ESI、MRM模式检测，以氘代药物作为内标定量。该方法使用电离子化的快速极性切换技术、单针进样就可同时检测正、负离子，运行时间为13min，能够检测包括左旋咪唑在内的几乎所有驱虫药。方法的CCa为0.83μg/kg，CCβ为1.4μg/kg，回收率在94%～104%之间。

Garrido Frenich等采用UPLC-MS/MS方法同时测定鸡蛋中包括咪唑类驱虫药在内的多种药物残留。分析柱为Acquity UPLC BEH C18(100mm×2.1mm，1.7um)，流动相为甲醇和0.05%的甲酸溶液，流速为0.3mL/min，进样量5μL，柱温30℃，毛细管电压3.0kV，源温度120℃，脱溶剂温度350℃，锥孔气流量80L/h，脱溶剂气流量600L/h，ESI模式监测。在10μg/kg和100μg/kg两个浓度水平下，左旋咪唑回收率分别为118.5%和94.8%，日间CV为14.6%，方法LOQ为0.1μg/kg。Cherlet等建立了猪组织中左旋咪唑残留的LC-大气压化学电离(APCI)-MS/MS检测方法。采用正已烷-异戊醇(95+5，v/v)提取猪组织中的左旋咪唑，以LiChrospher 60 RP-select B(125mm×34mm，5μm)为色谱分离柱，含有7.7%(体积比)四氢呋喃和0.3%(体积比)三乙胺的0.1mol/L乙酸铵溶液和乙腈为流动相，梯度洗脱，流速为1.0mL/min。质谱在正离子模式电离，对左旋咪唑主要离子产物m/z178.0进行选择反应监测(SRM)模式检测，用甲基左旋咪唑为内标定量。在猪肌肉、肾脏、皮肤+脂肪组织中的LOQ为5ug/kg，肝脏为50μg/kg；LOD在2～4μg/kg之间；日内CV小于20.1%，日间CV小于11.7%。Lopes等开发了同时检测金头鲷中左旋咪唑等32种兽药残留的方法。采用改进的QuEChERS方法提取，乙腈～甲醇(75+25，v/v)作为提取溶剂，UPLC-MS/MS测定。在10μg/kg、25μg/kg、50μg/kg和100μg/kg添加浓度，方法平均回收率在69%～125%之间，日内和日间RSD分别小于20%和30%；LOD和LOQ分别为7.5μg/kg和25μg/kg，CCa为16.7ug/kg，CCβ为23.5ug/kg。

3)离子阱质谱(LC-MSn)

Gallo等报道了采用LC-MSn测定饲料中左旋咪唑的分析方法。样品经LLE提取后，直接进仪器检测。采用反相色谱分离，ESI电离，MSn测定。利用MSn可做多级质谱分析的特点，监测2个子离子。该方法按照欧盟法规882/2004/EC对重现性、耐用性、特异性和定量限进行实验室内验证，结果表明该方法可靠，适用于猪、牛、兔子和家禽饲料。该方法平均回收率超过92%，RSD小于15.2%；LOQ为2.0mg/kg。

4) 飞行时间质谱(LC-QTOF/MS)

Hess等报道了尿液中左旋咪唑及其代谢物阿米雷司的LC-QTOF/MS分析方法。该方法在2.5～250ng/mL范围呈良好线性；左旋咪唑和阿米雷司的LOD分别为0.51ng/mL、0.65ng/mL，LOQ为1.02ng/mL和0.76ng/mL；方法准确度为-1.96%～-14.3%(左旋咪唑)、-11.9%～-18.5%(阿米雷司)，日间精密度为8.36%～10.9%(左旋咪唑)、5.75%～11.0%(阿米雷司)，日内精密度为10.9%～16.9%(左旋咪唑)、7.64%～12.7%(阿米雷司)。

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