金晶 殷爱琴 徐子茗 哈尔滨市南岗区疾病预防控制中心

本文对微生物实验室在培养基购置、贮存、制备、使用等方面应采取的质量控制措施进行讨论，谈一些观点和看法。希望有助于微生物检测工作的同行们更好的开展工作。

1 培养基、抗血清和试剂对微生物检验质量的影响

1.1 购置培养基、抗血清和试剂时要求供应商提供产品质控证书，尽量选择通过ISO9000认证的生产厂家。

使用前首先对外观、批号、pH 值、灭菌要求、选择性等进行初步评估，用阳性和阴性对照菌株做质量控制实验，要按照培养基和试剂标签说明的贮藏条件保存，自配的染液每周必须作质控。如有条件可参照国际食品微生物与食品卫生委员会提供的关于培养基质控方法进行质控。

1.2 使用 培养基的使用应在有效期内，开封后的保存、制备过程中器皿管壁的洁净度以及配制时的pH值要严格按规定控制，不同批号的培养基和试剂不要混合使用。目前市售的大多数为半成品培养基，无论是分装后灭菌，还是无菌分装，都应进行严格的无菌试验，证明无菌生长后才能使用。从可靠来源获得的诊断血清应注明收到的日期，如为冻干制品，还应注明配成水溶液的日期。使用前检查外观应清澈，如出现混浊表示己被杂菌污染。使用时应注意其有效期和滴度，使用前用标准菌株试验其敏感性和特异性。

2 培养基的储存

干粉培养基应保存在阴凉干燥处，要避免阳光直射；未开瓶的培养基在室温下的最长保存2年，开瓶后的干粉培养基易吸湿，应注意防潮并在6个月内用完。应定期对储存中的培养基进行常规检查，如容器密闭性复查、首次开封日期、内容物的感官检查，如果培养基发生结块、颜色异常和其他变质迹象就不能再使用。

3 培养基的性能测试

3.1 外观控制制备好的培养基应有相应的颜色，一般的培养基应澄清、无浑浊、无沉淀。使用前应检查培养基的颜色是否发生变化，是否蒸发／脱水。

3.2 污染控制 从每批制备好的培养基中选取部分进行污染测试(无菌试验)，确定无微生物生长方可使用。

3.3 性能测试

3.3.1 测试菌株选择测试菌株是具有其代表种的稳定

特性并能有效证明实验室特定培养基最佳性能的一套菌株，应来自国际／国家标准菌种保藏中心ATCC标准菌株，菌株的选择参考卫生行业标准WS/T232-2002《商业性微生物培养基质量检验规程》。

3.3.2 定量测试方法改良Miles-Misra法测试菌株过夜培养物10倍递增稀释；测试平板和参照平板划分为4个区域并标记；从最高稀释度开始，分别滴一滴稀释液于试验平板和对照平板标记好的区域；将稀释液涂满整个1/4区域，37℃培养18小时；对易计数的区域计数，按公式计算生长率(生长率=待测培养基平板上得到的菌落总数／参考培养基平板上获得的菌落总数)。非选择性培养基上目标菌的生长率应不低于0.7，该类培养基应易于目标菌生长；选择性培养基上目标菌的生长率应不低于0.1。

3.3.3 半定量测试方法 改进的划线法接种法平板分ABCD四区，共划16条线，平行线大概相隔0.5cm，每条有菌落生长的划线记作1分，每个仅一半的线有菌落生长记作0.5分，没有菌落生长或生长量少于划线的一半记作0分，分数加起来得到生长指数G。目标菌在培养基上应呈现典型的生长，而非目标菌的生长应部分或完全被抑制， 目标菌的生长指数G大于6时，培养基可接受。

3．3．4 定性测试方法平板接种观察法用接种环取测试菌培养物，在测试培养基表面划平行直线。按标准中规定的培养时间和温度对接种后的平板进行培养， 目标菌应呈现良好生长，并有典型的菌落外观、大小和形态，非目标菌应是微弱生长或无生长。

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