产品索引	5872
中文名称：	PCR产物及凝胶回收试剂盒
英文名称：	MagExtractor®-PCR & Gel Clean up-
产品编号：	NPK - 600
产品类别：	分子生物学
生产厂家：	TOYOBO
产品价格：	300元
产品规格：	50次

DNA Fragment Purification Kit

MagExtractor^®

-PCR & Gel Clean up-

使用说明书

(Code No. : NPK – 601)

TOYOBO CO. , LTD.Biochemical Operation Department

OSAKAJAPAN

—目录—

[1] 前言 ........................................................................................... 1

[2] 纯化流程...................................................................................... 2

[3] 试剂盒中所包含的物品................................................................. 3

[4] 试剂盒以外所需要的其他物品...................................................... 3

[5] 回收DNA溶液............................................................................. 4

[6] 回收琼脂糖凝胶........................................................................... 5

[7] 疑难解答...................................................................................... 8

注意：

本试剂盒中所包含的都是研究用试剂。请不要用于诊断，临床等场合。在使用本试剂盒的时候，请严格遵守实验室的基本注意事项，注意安全。由于本试剂盒内含有对人体有害的试剂，所以请务必严格遵守各试剂的相关使用说明书，按要求使用保护罩等防护措施。

[1] 前言

MagExtractor - PCR & Gel Clean up-利用在Chaotropic（盐）试剂存在的情况下，核酸能吸附在硅胶上的特性^1），用于手动对DNA片段进行纯化。本试剂盒采用磁硅胶粒子，若使用磁性台架，则能最大限度地减少复杂的离心操作，能够快速地的纯化DNA片段。

1)Proc. Natl. Acad. Sci. USA 76(2) 615-619(1979)

特征

·从DNA溶液（约100μl），以及TAE·TBE琼脂糖凝胶（约0.3g）中， 能够以平均回收率60～70％比例回收DNA片段（约100bp～50kbp）。 ·能够在5分钟之内从DNA溶液中，或者在15分钟之内从琼脂糖凝胶 中回收DNA片段。 ·由于在室温下琼脂糖凝胶可以被融解，因此无需进行加热反应。 * 要彻底去除混杂在回收液中的乙醇时则需要进行加热处理（55℃）。

试剂盒的用途

·脱盐，去除dNTPs。 ·去除引物。 ·去除酶（碱性磷酸酶等）。 ·从电泳后的琼脂糖凝胶块中回收DNA。

回收的DNA的用途

·RI.Non-RI测序反应 ·限制酶反应 ·标记反应 ·杂交反应 ·连接反应 ·转化反应 ·扩增反应

[2] 纯化流程

下图显示为使用MagExtractor-PCR &

Gel Clean up-时的纯化流程。

纯化DNA片段

Elute

75％乙醇

洗净液

溶出液

磁石 磁性或离心分离

磁珠

Wash

Bind

Melt

凝胶块

吸附液

电泳后的凝胶

[3] 试剂盒中所包含的物品

本试剂盒中包含以下试剂。（200次份）

	试剂量	保存条件
吸附液*	88ml	避光室温保存
洗净液*	132ml	室温保存
磁珠	7ml	室温保存

*吸附液，洗净液在低温情况下会析出结晶。请一边用手捂暖，一边

将其倒转混合让结晶溶解后使用。另外，吸附液及洗净液内含有蛋白

变性剂。在使用时务必注意，万一沾到身体，请立刻用清水冲洗。

[4] 试剂盒以外所需要的其他物品

1．试剂

·灭菌蒸馏水<溶出液>

·75％乙醇<洗净用>

2．器具，器材

·1.5ml小型试管用磁性台架

·简易台式离心机

·漩涡混合器

·Heat Block 55℃（用于在需要去除混于回收液中的乙醇的场合）

*可使用本公司的磁性台架Magical Trapper（Code No.：MGS-101）等产品。

[5] 回收DNA溶液 1．前言 ·本操作程序用于从DNA溶液（约100μl）中回收DNA片段。 ·能够回收的DNA大小约为100bp～50kb。另外，40bp以下的核酸 几乎能够被加以除去。 · 磁珠的最大吸附量为每30μl磁珠大约吸附5μg。使用时请以2.5μg左右为参考量。 ·能够从PCR反应液，限制酶反应溶液，碱性磷酸酶反应液等各种反 应液中回收DNA。 ·回收后的DNA，能够用于限制酶处理、测序、连接、标记、杂交等多种反应

2．操作程序

DNA溶液（100μl）^1）

↓← 400μl吸附液

↓← 30μl磁珠²⁾

↓不时用漩涡混合器搅拌，并放置约1～2min（室温）

B/F（固/液）分离^3）

↓←（600μl洗净液）^4）

↓漩涡混合器搅拌10sec，

B/F分离。^3）

↓←1ml75％乙醇^4）

↓漩涡混合器搅拌10sec，

B/F分离。^3）

瞬时高速离心，彻底去除上清部分。

（打开小型试管的盖子，55℃下放置5min，干燥）^4）

↓←25～100μl蒸馏水

↓漩涡混合器搅拌10sec，

（在无法充分将粒子分离的情况下，请用pipetting来分离粒子。）

↓放置2min

B/F分离，回收上清液。^5）

1）请尽量不要含矿物油。

2）使用磁珠前，请彻底悬浊混合后再使用。

3）将试管放置在磁性台架上，把磁珠挪近磁石，用微量移液器持续去除

上清部分。通过乙醇清洗时，可以通过将上清液倒入其他容器进行去除。

B/F分离时推荐使用对应于微型试管的磁性台架，但也可用简易台式离心机，用大约6,000r.p.m程度，5sec.的离心进行分离。g会根据离心机的转子口径而发生变化，所以请调整旋转数，使得能更有效地集合粒子，并保证凝结不至于过度。

4）请参照3.的表。

5）回收液中少量混入的磁珠并不会有碍下一次的反应，但在测定吸附度

等场合时，请通过瞬时高速离心除去磁珠。

3．关于工序的省略，纯化规模

·洗净工序，加热工序可以省略（请参照下表）

用途	洗净		干燥	备注
	洗净液	75％乙醇溶液
测序，限制酶反应，连接反应等的前处理	－	1次	－	标准操作程序。回收的核酸能用于Low Buffer系列的限制酶切断。
盐的混入会产生影响的场合	－	2次	－	吸附液和洗净液含有高浓度的盐分。
乙醇的混入会产生影响的场合	－	1次（2次）	55℃，5min	用于易受乙醇影响的前处理。
要去除混入的酶的场合	1次	1次（2次）	－	用于去除碱性磷酸酶等。
要通过吸光度来准确定量核酸浓度的场合	1次	2次	－	吸附液内含有能吸收紫外线的物质。

·根据DNA溶液的量，可以按比例减少本试剂盒中附带的吸附液、洗净

液和磁珠的使用量。此时，无需减少75％乙醇溶液的使用量。

[6] 回收琼脂糖凝胶

1．前言

·本操作程序适用于从TAE或者TBE琼脂糖凝胶（约0.3g）中回收

DNA片段。本操作程序是以琼脂糖浓度2％以下的凝胶为对象。

要使用2％以上的凝胶时，推荐所使用凝胶的量少于0.3g。另外，本

操作程序不需要使用特殊的低融点琼脂糖凝胶。

·能够回收的DNA大小约为100bp～50kbp。

·回收后的DNA主要用于连接反应、标记、测序等反应。

2．操作程序

琼脂糖凝胶电泳，溴化乙锭染色。

↓

在UV照射下（Long wave），为了使得目标条带尽可能地变小，使

用切割刀或手术刀等进行切开。

↓

把切开的琼脂糖切细，放到1.5ml小型试管中。（此时称得重量，如

果大于0.3g则分几次进行。）^1）

↓←400μl吸附液

在凝胶完全溶解之前，将其放置在室温中，并不时进行搅拌。^2）

↓←30μl磁珠^3）

↓经常用漩涡混合器搅拌，并放置2min（室温），

B/F分离。^4）

↓←600μl洗净液

↓漩涡混合器搅拌10sec，

B/F分离。^4）

↓←1ml75％乙醇溶液^5）

↓漩涡混合器搅拌10sec，

B/F分离。^4）

瞬时高速离心，彻底去除上清部分。

（打开微型试管的盖子，55℃下放置5min，干燥）^5）

↓←25～100μl蒸馏水

↓漩涡混合器搅拌10sec

（在无法充分分开粒子的情况下，请用pipetting来分散粒子。）

↓放置2min

B/F分离，回收上清液^6）

1） 将琼脂糖凝胶制成切片，以利于溶解。

2） 如果想要快速溶解琼脂糖凝胶或凝胶难以溶解时，请加温至55℃

5min。

3） 使用磁珠前，请彻底混合后再使用。

4） 将试管放置在磁性台架上，把磁珠挪近磁石，用微量移液器持续去

除上清部分。要洗净乙醇，也可以通过将上清液倒入其他容器来去除。

B/F分离时推荐使用对应于微型试管的磁性台架，但也可使用简易台式离心机，用大约6,000r.p.m程度，5sec.的离心进行分离。g会根据离心机的转子口径而发生变化，故请调整旋转数，使得更有效地集合粒子，并保证凝结不至于过度。

5） 请参照3.的表。

6） 回收液中混入少量磁珠并不会有碍下一次的反应，但在测定吸附

度等场合时，请通过瞬时高速离心除去磁珠。

3．关于工序的省略，纯化规模

·洗净工序，加热工序可以省略（请参照下表）

用途	洗净		干燥	备注
	洗净液*	75％乙醇溶液
连接反应, 测序等	1次	1次	－	标准操作程序。
盐的混入会产生影响的场合	1次	2次	－	吸附液和洗净液中含有高浓度的盐分。
乙醇的混入会产生影响的场合	1次	1次（2次）	55℃，5min	用于容易受乙醇影响的前处理。
要通过吸光度来准确定量核酸浓度的场合	1次	2次	－	吸附液内含有吸收紫外线的物质。

*从琼脂糖凝胶中回收核酸时，必须用洗净液清洗。

·根据DNA溶液的量，可以按比例减少本试剂盒中附带的吸附液、洗净

液和磁珠的使用量。此时，无需减少75％乙醇溶液的使用量。

[7] 疑难解答

1．回收量低

原因	对策
去除乙醇不彻底	瞬时高速离心后，请仔细去除75％乙醇溶液。
溶出不充分	通过10mM Tris-HCI（pH8.0），或者TE buffer能够提高溶出的效率。另外，如果加温至55℃保持2min能够更加有效地提高溶出效率。
吸附时间不合适	如果吸附过剩，回收量则会变少。最恰当的吸附时间是，对于DNA溶液为1～2min，对于凝胶则为2min。
溶出时的搅拌不充分	溶出时，如果磁珠的混合不充分，回收量会减少。在瞬时高速离心后，磁珠会在底部结块，请仔细将其散开。特别是在从琼脂糖凝胶中进行纯化的时候，结块的磁珠会比较难以重新散开。
琼脂糖凝胶的量大于0.3g	请减少琼脂糖凝胶的量。
使用2％以上的琼脂糖	请减少琼脂糖凝胶的量。
没有用洗净液清洗	从琼脂糖凝胶中回收DNA时，请务必先用洗净液清洗。

2．回收的核酸的吸光度不准确

原因	对策
清洗不充分	吸附液中含有吸收紫外线的物质。要对回收的核酸定量，请用洗净液以及75％乙醇溶液来清洗。
混入了吸附液	吸附液中含有吸收紫外线的物质。请仔细去除吸附液。用面纸等擦拭试管的盖子上沾有的吸附液，可以有效改善状况。

3．回收后的核酸不能良好地进行反应

原因	对策
盐阻碍了反应	请添加两次75％乙醇溶液进行清洗的工序。吸附液和洗净液都含有高浓度的盐分。
乙醇阻碍了反应	请按照操作程序，对乙醇进行干燥处理。
酶未能完全去除	要去除反应液中的碱性磷酸酶等酶，请用洗净液以及75％乙醇溶液进行清洗。
反应用的酵素过少	从琼脂糖凝胶中回收核酸时，反应用的酶量应比通常要多，这样就能得到准确良好的结果。
使用的琼脂糖级别不够	请使用高级别的琼脂糖。
从琼脂糖凝胶中分离条带时，受到的紫外线照射过多	请用Long wave（365nm附近）的紫外线来进行切片工作。

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