非甾类同化激素类药残留分析前处理方法——净化（三）

时间：2023-03-25 03:38:32来源：food栏目：食品快速检测阅读：

非甾类同化激素类药残留分析前处理方法——净化（三）

[db:作者] / 2022-12-13 00:00

6)基质固相分散(matrix solid-phase dispersion，MSPD)

MSPD是将样品与填料一起混合研磨，使样品均匀分散于固定相颗粒表面，制成半固态后装柱，然后根据“相似相溶”原理选择合适的洗脱剂洗脱。该技术浓缩了传统样品前处理中匀浆、组织细胞裂解、提取、净化等多个过程，避免了待测物在这些过程中的损失，提取净化效率高、耗时短、节省溶剂、样品用量少，但研磨的粒度大小和填装技术的差别会使淋洗曲线有所差异，不易标准化。

A.二苯乙烯类

尹怡等建立了MSPD-GC-MS法测定水产品中DES残留量，并对MSPD与SPE的净化效果进行了比较。称取5g已绞碎混匀的肌肉于50mL具塞离心管中，加入5g Florisil与20mL乙酸乙酯，涡动混合2min，4500r/min离心5min，将上清液转移至100mL梨形瓶中，在剩余样品中继续加入15mL乙酸乙酯，重复上述操作，合并上清液，于40℃旋转蒸发至干，分2次加入10mL乙酸乙酯溶解残留物，并转移至50mL离心管中，加入5g的Florisil，涡动混合2min，4500r/min离心5min，上清液氮气吹干，衍生化，GC-MS检测。该方法回收率大于90%，LOD为0.3μg/kg，与SPE法相比，MSPD法更灵敏、简便、省时以及节省溶剂。

丁雅韵等采用MSPD和SPE结合的方法提取并净化动物肝脏中的DES。称取0.5g匀浆后的样品于玻璃研钵中，加入2g左右的C18填料(用30mL的乙酸乙酯、正己烷淋洗后风干)，用研杵轻轻研磨使其混合均匀，在通风橱中自然风干1h，均匀装入10mL注射器简，用注射器活塞轻压到3.5mL左右。用8mL正已烷分两次洗涤玻璃研钵和研杵，并将洗涤液淋洗柱子，弃去淋洗液；再用8mL乙酸乙酯分两次洗涤玻璃研钵和研杵，并用洗涤液洗脱柱子，收集乙酸乙酯洗脱液。氮气吹干后，SPE进一步净化，经衍生化后，用毛细管GC-MS检测。该方法LOD低于1μg/kg，不同DES添加量的回收率为81.6%～100.9%，CV为8.7%～13.2%。

刘宏程等采用MSPD法提取和净化牛奶中的DES、HES和DIS。比较了3种填料C18、Florisil和N-丙基乙二胺(PSA)对牛奶中DES、HES和DIS的净化效果。C18净化效果差，蛋白等共萃物多；Florisil对3种雌激素吸附能力弱，脱蛋白净化效果中等，共萃物多，选择性差；而PSA对弱酸性的雌激素有离子作用吸附力。结果表明，PSA净化效果最好。操作步骤为:称取1g均质样品于研钵中，用稀氨水调pH8.5，加1g PSA填料，在通风橱中放置30min，挥干水分，充分研磨，均匀装入底部垫上滤纸的10mL注射器，上层再垫一片滤纸，并把填料轻轻压紧。用5mL二氯甲烷～甲醇(97+3，v/v)冲洗，再用5mL二氯甲烷甲醇(80+20，v/v)洗脱，洗脱液用氮气吹至近干，流动相溶解定容至0.25mL，经0.45um滤膜过滤后，HPLC检测g该有法平均回收率为84.1%～93.5%，RSD为3.5%～7.8%；DES、HES和DIS的LOD分别为0.004mg/kg、0.004mg/kg和0.006mg/kg，LOQ分别为0.01mg/kg、0.01mg/kg和0.02mg/kg。

Li等采用MSPD提取净化奶和肉中的6种雌激素(包括DIS)。以C18和Florisil为混合填料，乙腈洗脱后，LC-MS/MS测定。该方法LOD为0.11～0.81ug/L，LOQ为0.61～2.20ug/L；回收率在59.6%～128.5%之间，RSD为1.2%～8.0%。

B.RALs

Lagana等采用MSPD方法提取和净化鱼组织中的ZON、a-ZOL和β-ZOL，方法分别以反相(C18)和正相(中性氧化铝)填料作为基质分散剂，GCB柱进一步净化，LC-MS/MS检测。结果，在100ng/g的添加水平，C18为填料的回收率为83%～103%，CV低于11%；中性氧化铝为填料的回收率为67%，CV低于18%，LOD为0.1～1.0ng/g。该作者又优化了C18 MSPD方法，取匀浆的肌肉和肝脏组织0.50g放置于玻璃研钵中，再加入C18填料2.0g，充分研磨、混合，肉酱可以干燥或成粉状，将混合物加到底部有滤板的聚四氟乙烯柱中，15mL甲醇-水(7+3，v/v)、10mL水、10mL酸化甲醇(10mmol/L甲酸)和3mL甲醇洗涤，15mL二氯甲烷-甲醇(8+2，v/v)洗脱，40℃水浴中氮气吹干，250μL乙腈-甲醇-水(37+16+47，v/v)复溶，LC-MS/MS分析。并利用该方法研究了虹鳟鱼体内中ZON的代谢情况。

7)凝胶渗透色谱(gel permeation chromatography，GPC)

GPC柱内装有一定孔径的填料，柱中可供分子通行的路径有粒子间的间隙(较大)和粒子内的通孔(较小)。当样品溶液流经色谱柱时，较大的分子被排除在粒子的小孔之外，只能从粒子间的间隙通过，速率较快；而较小的分子可以进入粒子中的小孔，通过的速率要慢得多。经过一定长度的GPC柱，分子根据相对分子质量被分开，相对分子质量大的淋洗时间短，相对分子质量小的淋洗时间长，从而达到分离净化目的。李佩佩等建立了GPC-SPE/HPLC法测定水产品中DES的分析方法。样品经乙醚超声提取和漩涡振荡后以乙酸乙酯_环已烷(1+1，v/v)为流动相进行GPC净化，再过HLB柱进一步净化，HPLC在254nm波长下测定，外标法定量。结果显示DES在0.02～2.0mg/L质量浓度范围内呈良好的线性关系，线性系数(r)大于0.999；空白样品在10.0μg/kg、50.0μg/kg、200μg/kg三个加标水平下的平均回收率为84%～93%，RSD小于6.0%；LOQ为5.0μg/kg。

8)分散固相萃取(dispersive solid phase extraction，DSPE)

DSPE是美国农业部于2003年起提出使用的一种新的样品前处理技术。该技术的核心在于选择对不同种类的农药都具有良好溶解性能的乙腈作为提取剂，净化吸附剂直接分散于待净化的提取液中，吸附基质中的干扰成分，具有操作简便，处理快速等优点，在多农残分析中大量应用，目前也开始在兽残分析中使用。

唐晓姝建立了牛奶、酸奶、鸡肉、鸡肝、牛肉等动物源食品中4种雌激素(包括DES)的DSPE-LC-MS/MS分析方法。样品中加入乙腈沉淀蛋白质，用无水MgSO4去除水分，再用PSA极性吸附剂分散固相萃取净化，LC-MS/MS测定，达到简单、快速、低成本和高回收率的目的。在优化条件下，该方法的LOD为0.66～8.26μg/L，在三个水平下的加标回收率为75.00%～109.33%，RSD为0.24%～9.23%。Wozniak等开发了一种QuEChERS(Quick，Easy，Cheap，Rugged，Safe)方法净化肌肉样品中的RALs和二苯乙烯类药物。用乙酸乙酯提取，再用硫酸镁和醋酸钠分离水相和有机相，有机相中加入C18、PSA和硫酸镁作DSPE净化后，进LC-MS/MS测定。方法回收率在83%～115%之间，室内重现性小于22%；几种药物的CCa和CCβ分别低于0.23μg/kg和0.39μg/kg。

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