镇静剂类药残留测定方法（二）

时间：2023-03-25 01:12:59来源：food栏目：食品快速检测阅读：

镇静剂类药残留测定方法（二）

[db:作者] / 2022-12-20 00:00

(3)气相色谱-质谱法( gas chromatography-mass spectrometry，GC-MS)

1)巴比妥类

巴比妥类药物采用GC-MS测定，既可以不衍生直接测定，也可进行甲基化反应，降低药物极性，降低挥发温度，减少药物分解，并提高检测灵敏度。

A.衍生

赵海香等建立了猪肉中巴比妥、异戊巴比妥、苯巴比安甲基化衍生GC-MS测定方法。提取液残留物吹干后，加1mL丙酮、20μL碘甲烷和50mg无水碳酸钾，涡动溶解，52℃甲基化衍生反应2.5h，冷至室温，离心，取上清液用N2吹干，乙酸乙酯定容，采用HP-5毛细管柱分离，电子轰击电离源(EI)质谱在选择离子(SIM)模式检测，外标法定量。3种巴比妥类药物的添加标准曲线的线性回归相关系数均在0.99以上，线性范围为2.5～ 50μg/kg，回收率为65%～112%，RSD为5.14%～17.2%，LOD均为1 μg/kg。该作者还采用微波辅助衍生化方法测定了猪肝和猪肾中巴比妥、异戊巴比妥、司可巴比妥钠和苯巴比妥。残留物中加入衍生化试剂1 mL丙酮、150 μL碘甲烷和50 mg碳酸钾，混合均匀密封，放入加有250 mL蒸馏水的500 mL烧杯中，置于微波炉中，低火档加热，衍生化8min后，取出冷却至室温，离心，移取有机相，N2吹干，用乙酸乙酯定容至1 mL， GC-MS测定。方法LOQ在猪肝中不高于2.20 μg/kg，猪肾中不高于3.35 μg/kg；4种药物的加标回收率为68%～90%，RSD均不高于10%。

B.不衍生

陈建虎建立了不衍生，直接采用气相色谱-离子阱质谱(GC-MSn)测定血液中巴比妥、异戊巴比妥、速可眠、苯巴比妥的方法。载气为He，初始柱温160℃(保持1 min)，以15℃/min 的升温速率升温至280℃(保持1 min)，进样口温度280C，离子阱质谱温度为170℃，接口温度270℃。巴比妥、苯巴比妥等均为含氮化合物，电负性强，在进行全离子扫描检测时，形成较稳定的[M+1]+峰作为母离子，选用适当CID电压，在二级质谱图上清晰地得到由所选母离子产生的特征碎片离子，匹配度提高到95%以上，同常规的GC-MS检测结果相比，GC-MSn的信/噪比(SN)大大提高了灵敏度。该方法巴比妥类药物LOD为0.04～0.10μg/mL，回收率为80.3%～92.6%。Saka等报道了不用衍生化直接测定血浆中异戊巴比妥和苯巴比妥的GC-MS方法。由于巴比妥类药物呈酸性，GC-MS测定吸附效应较大，使灵敏度降低，该作者在进样液中加入3%甲酸可减少与毛细管吸附，提高灵敏度。方法线性系数大于0.9995，准确度和精密度满足FDA要求。

2)苯二氮卓类

苯二氮卓类药物既可以不用衍生直接GC-MS测定，也可以通过衍生化，降低药物气化温度和提高检测灵敏度。

A.不衍生

常青等建立了血浆中10种镇静药(包括奥沙西泮、地西泮、硝西泮、氯硝西泮、艾司唑仑、阿普唑仑和三唑仑等7种苯二氮卓类药物)的GC-MS快速定性定量分析方法。药物不衍生直接测定，色谱柱为HP-5MS毛细管柱，为保证灵敏度，采用脉冲不分流模式进样，根据溶剂的膨胀体积和衬管体积，实现了大体积进样，进样量达3μL。MS采用全扫描(SCAN)模式定性，SIM模式下采用内标法定量。所测样品色谱分离良好，线性关系良好，药物的回收率均在92%～11.7%之间，LOD为2～20 μg/L。Wang等用GC-MS不衍生测定猪组织中地西泮、艾司唑仑、阿普唑仑、三唑仑残留。检测线性范围为10～500ng/mL (地西泮)和20～1000ng/mL(艾司唑仑、阿普唑仑、三唑仑)；回收率为75%～104%，CV为1.3%～10%； LOD为2μg/kg (地西泮)和5μg/kg(艾司唑仑、阿普唑仑、三唑仑)。汪丽萍等建立了猪肉中地西泮、艾司唑仑、阿普唑仑和三唑仑等4种苯二氮卓类药物残留的检测方法。分析物净化后用乙酸乙酯溶解，不衍生直接GC-MS测定。质谱采用EI、SIM模式检测。地西泮线性范围为5～ 100μg/L，回收率为60%～70%，RSD为7.6%～ 12.9%，LOD 为2μg/kg；艾司唑仑、阿普唑仑、三唑仑的线性范围为50～1000μg/L，回收率为60%～115%，RSD为3.8%～19.7%，LOD为10μg/kg。

B.衍生

苯二氮卓类药物GC-MS检测常用的衍生化方法有硅烷化、烷基化和乙酰化，特别是乙酰化方法解决了硅烷化和烷基化衍生需要加热的问题，反应试剂也易于氮气吹干，减少了额外萃取步骤；同时，衍生化产物在几天之内都很稳定，检测峰形良好。

Lee等测定毛发中的苯二氮卓类残留，提取物用N-甲基-N-三甲基硅烷三氟乙酰胺(MSTFA)在70℃硅烷化衍生30 min，GC-MS测定。色谱柱为HP-5MS毛细管柱(30 m， 0.25 mm i.d， 0.25 um膜厚)，进样口温度250℃，氦气流速1.0 mL/min，升温程序：起始温度100℃，1 min；以10℃/min上升至300℃；维持15min；单极质谱，EI 离子源，SIM方式检测。地西泮、劳拉西泮、去甲地西泮、奥西泮、替马西泮的LOD为5 ng，咪达唑仑和唑吡坦的LOD为10ng， LOQ为10～20 ng，回收率为71%～ 103%。

汪丽萍等建立了猪肉中硝西泮、氯硝西泮残留的GC-MS检测方法。残留物中加入丙酮0.5mL、碘甲烷20 μL、无水碳酸钾20mg，在60℃下，甲基化衍生反应30 min，采用GC-MS测定，EI、 SIM模式检测。回收率在80%左右，RSD为6.9%～14.9%，LOD 为16.7 μg/kg。实验发现，用非衍生化GC-MS方法检测硝西泮、氯硝西泮时，检测灵敏度较低；同时，因其结构中所含-NH基团与色谱柱作用，降低了柱效，但通过衍生化反应可以消除影响。

Borrey等测定尿中15种苯二氮卓类药物(包括阿普唑仑、氟硝西泮、氟西泮、凯他唑仑、劳拉西泮、三唑仑以及相应代谢物)。用吡啶-乙酸酐在室温下乙酰化衍生20 min，再用GC-MS测定。各药物回收率达80%以上，且衍生化产物可稳定4天；LOQ 为0.1～0.5 μg/mL，CV为1.1%～4.9%。Papoutsis等用GC-MS同时检测了血液中的阿普唑仑、氟硝西泮、氟西泮、凯他唑仑、劳拉西泮、三唑仑及其代谢物a-羟基阿普唑仑、7-氨基-氟硝西泮、4羟基阿普唑仑、脱甲基氟硝西泮、7-氨基脱甲基氟硝西泮、羟乙基氟西泮、N-脱烃基氟胺安定和a-羟基三唑仑。提取物采用吡啶和乙酸酐作为乙酰化衍生试剂，在室温下衍生20～30min后，为获得最大灵敏度，采用柱头注射法在聚二甲基硅氧烷色谱柱上分离，EI-MS测定。回收率均高于74%，CV为1.12%～4.94%；LOD和LOQ分别为0.52～58.47ng/mL和1.58～177.2ng/mL。

3)吩噻嗪类

吩噻嗪类药物一般直接测定，不用衍生化。

郑水庆等测定了血液中的苯海索、氯丙嗪和氯氮平。在pH>10条件下用苯-乙酸乙酯(1+1，v/v)提取，GC-MS全扫描法进行定性检测。色谱柱为HP-5MS毛细管柱(30m×0.25mm，0.25μm)，柱温：初温100℃保持1 min，以20℃/min升至280℃，保持15 min；进样口温度260℃；载气为氦气，流速1.0mL/min；分流进样，分流比20：1；质谱EI源温度230℃，传输线接口温度280℃，四极杆温度150℃；SIM模式定量检测；溶剂延迟8min。以地西泮-d5为内标定量，氯丙嗪LOD为0.3ng/mL，回收率为79.9%～85.5%，日内、日间精密度均小于5.1%。吕燕等I3测定了猪肝中氯丙嗪残留。猪肝中残留的氯丙嗪在碱性条件下经乙酸乙酯提取后，40℃水浴中旋转蒸发至近干，乙腈-正己烷LLP脱脂，C18柱净化，GC-MS在SIM模式下测定。方法回收率为80.2%～90.7%，RSD为5.9%～8.6%，LOD为1μg/kg。许世富(73)采用GC-MS测定了猪肝、猪肉中的氯丙嗪。用氨化乙酸乙酯提取，正己烷脱去脂肪，经C18柱净化后，用2%氨化乙酸乙酯洗脱，GC-MS测定。采用EI电离源方式进行SIM检测。方法LOD为1ng/g，回收率为78.2%～89.3%，RSD为4.34%～6.03%，日内CV为4.35%～5.67%，日间CV为3.97%～5.04%。

4)丁酰苯类

丁酰苯类药物极性很小，一-般净化后不衍生直接测定。

Adam采用GC-MS测定了猪肝中的阿扎哌隆和阿扎哌醇。色谱分离采用DB-1分析柱，初始温度40℃，维持1 min，以30℃/min升至140℃， 6℃/min 升至190℃，维持3 min，30℃/min 升至250℃，维持12.3 min，接口传输线280℃，质谱在EI、SIM模式下测定。LOD为10 μg/kg。Olmos-Carmona等采用GC-MS测定尿液中丁酰苯类药物。不衍生直接GC-MS在EI、SIM模式下测定。方法LOD分别为5μg/L (氯丙嗪、乙酰丙嗪、丙酰丙嗪、阿扎哌隆、开他敏)、50 μg/L(阿扎哌醇)、20 μg/L(塞拉嗪)、50 μg/L (阿扎哌醇)和10 μg/L (氟哌啶醇)，回收率均大于70%。

5)多种类

谭贵良等研究建立了同时测定腊肠中地西泮、奥沙西泮、艾司唑仑、阿普唑仑、三唑仑、苯巴比妥、异丙嗪7种镇静剂残留的GC-MS分析方法。试样中的镇静剂类药物经氨化乙腈和酸化乙腈提取，用C18固相萃取柱净化，直接上GC-MS分析。采用毛细管色谱柱DB-5MS(30m×0.25mm×0.25μm)进行分离，EI、SIM模式下测定，外标法定量(定量离子分别为256、205、259、279、313、204、72)。结果表明，7种镇静剂类药物在一定的含量范围内线性关系良好，相关系数大于0.997；LOD为0.020～0.082 mg/L；回收率为63.20%～88.23%，RSD为7.02%～16.89%。

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